华东部分地区羊源、水禽源产气荚膜梭菌的流行病学调查与毒力特性研究

发布时间：2021-01-05 18:30

　　产气荚膜梭菌是重要的人畜共患病原菌,在兽医临床已严重影响到畜禽的健康养殖。但国内有关该菌在肉羊与水禽的流行病学和毒力特性方面缺乏系统研究,一定程度制约了其临床防控。本研究采集了华东部分地区肉羊、水禽的样品,在对产气荚膜梭菌分子流行病学调查的基础上,鉴定了临床分离菌株的毒素基因型和药物敏感性。最后,运用实验小鼠对不同来源、毒素型产气荚膜梭菌的毒力进行测定,为该病的精准防控提供依据。1.华东部分地区肉羊源、水禽源产气荚膜梭菌的分子流行病学分析本实验对取自苏北地区的肉羊样品和华东部分地区的水禽样品进行快速增菌后,粗提DNA,以PCR法检测动物感染产气荚膜梭菌情况。结果显示,在肉羊临床934份粪样和20份组织样中,175份（18.74%）粪样和4份（20%）组织样检测出产气荚膜梭菌阳性。其中,健康粪样的阳性检出率为19.51%,发病粪样的阳性检出率为2.38%,检测出阳性组织样均为病死样;在水禽临床462份粪样和87份组织样中,202份（43.72%）粪样和3份（3.45%）组织样检测出产气荚膜梭菌阳性。其中,健康粪样的阳性检出率为45.79%,发病粪样的阳性检出率为4.35%;检测出阳性组织... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１?ＰＣＲ检测产气荚膜梭菌的特异性图??Ｆｉｇ．?ｌ－ｌ?Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?Ｍａｐ?ｆｏｒ?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ?ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??３：；４：；??

２．２?ＰＣＲ鉴定??挑取平板上符合生长特征的菌落，经増菌、提ＤＮＡ模板、ＰＣＲ后，１％琼脂糖凝胶电??泳进行验证，部分结果如图２－２所示。可见符合生长特征的菌落ＰＣＲ验证均为阳性。??ｂｐ?Ｍｌ?２３４５６７８９?１０??５Ｍ世：??图２－２分离菌ＰＣＲ扩增电泳图??Ｆｉｇ．?２－２?Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?Ｍａｐ?ｏｆ?Ｉｓｏｌａｔｅｄ?Ｂａｃｔｅｒｉａ?ｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＬ２０００分子质量标准；１￣１０：分离菌。??２．３革兰染色镜检??细菌纯化后经革兰氏染色镜检，可见两端钝圆的革兰阳性直杆状菌，多为单个散在或??成对排列，无鞭毛，如图２－３所示。??２．４亚甲基蓝染色镜检??细菌经亚甲基蓝染色后能看到荚膜，如图２－４所示。??Ｖ?氣?＾：‘，？：：一??、＇?＜??Ｉ?＇。：??图２－３细菌革兰氏染色结果（ｘｌＯＯＯ）?图２－４细菌亚甲基蓝染色结果（ｘｌ〇〇〇）??Ｆｉｇ．?２－３?Ｇｒａｍ?ｓｔａｉｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｂａｃｔｅｒｉａ?Ｆｉｇ．?２－４?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ?ｂｌｕｅ??２．５?生化试验（Ｘ＿?ＳｔａｂｉｎｇｒｅＳＵ＇ｔＳ（Ｘｌ〇〇〇）??对分离纯化后的肉羊源和水禽源细菌进行生化试验的结果与标准株相同，如表２－２。??

２．２?ＰＣＲ鉴定??挑取平板上符合生长特征的菌落，经増菌、提ＤＮＡ模板、ＰＣＲ后，１％琼脂糖凝胶电??泳进行验证，部分结果如图２－２所示。可见符合生长特征的菌落ＰＣＲ验证均为阳性。??ｂｐ?Ｍｌ?２３４５６７８９?１０??５Ｍ世：??图２－２分离菌ＰＣＲ扩增电泳图??Ｆｉｇ．?２－２?Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?Ｍａｐ?ｏｆ?Ｉｓｏｌａｔｅｄ?Ｂａｃｔｅｒｉａ?ｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＬ２０００分子质量标准；１￣１０：分离菌。??２．３革兰染色镜检??细菌纯化后经革兰氏染色镜检，可见两端钝圆的革兰阳性直杆状菌，多为单个散在或??成对排列，无鞭毛，如图２－３所示。??２．４亚甲基蓝染色镜检??细菌经亚甲基蓝染色后能看到荚膜，如图２－４所示。??Ｖ?氣?＾：‘，？：：一??、＇?＜??Ｉ?＇。：??图２－３细菌革兰氏染色结果（ｘｌＯＯＯ）?图２－４细菌亚甲基蓝染色结果（ｘｌ〇〇〇）??Ｆｉｇ．?２－３?Ｇｒａｍ?ｓｔａｉｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｂａｃｔｅｒｉａ?Ｆｉｇ．?２－４?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ?ｂｌｕｅ??２．５?生化试验（Ｘ＿?ＳｔａｂｉｎｇｒｅＳＵ＇ｔＳ（Ｘｌ〇〇〇）??对分离纯化后的肉羊源和水禽源细菌进行生化试验的结果与标准株相同，如表２－２。??


本文编号：2959093