云南撒坝猪大肠杆菌OmpF缺失株的构建及其耐药性分析
发布时间：2021-01-07 02:54
外膜蛋白F（OmpF）是大肠杆菌重要的外膜蛋白之一，孔径为1nm，许多营养物质和β-内酰胺类抗生素大多经过此通道扩散入菌体内。β-内酰胺类抗生素作用的靶分子是位于细菌细胞膜上的青霉素结合蛋白（PBPs），革兰氏阴性菌对β-内酰胺类耐药性主要与β-内酰胺酶的产生和外膜的存在有关。细菌膜孔蛋白表达量降低或者缺失将会造成细菌对β-内酞胺类抗生素产生耐药性，基因敲除技术是研究基因功能的重要手段。为研究OmpF基因在大肠杆菌对β-内酰胺类耐药中的作用，本试验利用λ噬菌体RED重组系统对本实验室保存的大肠杆菌菌株构建OmpF基因缺失株，并通过PCR、聚丙烯酰胺凝胶电泳、测序等方法对缺失株进行鉴定，成功构建了OmpF基因缺失株。运用药敏实验和MIC实验检测比较大肠杆菌亲本株与基因OmpF缺失株对β-内酰胺类中几种抗生素的耐药性，从而了解OmpF与β-内酰胺类抗生素耐药关系。结果显示：在本实验中成功构建了OmpF基因缺失株，在对亲本株与基因缺失株做耐药性检测发现，药敏试验中亲本株对CZ，CFP，AMP，MPN，IPM，CRO，CAZ，VI都敏感；而缺失株对CZ，MPN，AMP，CAZ为中介，对CFP，...
【文章来源】：云南农业大学云南省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
菌株F-M-2抑菌圈直径菌株F-M-2抑菌圈直径分别是：24mm（氯霉素），18mm（氨苄西林）
图3-1 菌株 F-M-2抑菌圈直径菌株 F-M-2抑菌圈直径分别是：24mm（氯霉素），18mm（氨苄西林）Fig 3-1 The antibacterial circle diameter of strain F-M-2The antibacterial circle diameter of strain F-M-2 is respectively：24mm（Chloramphenicol），18mm（Ampicillin）3.2 阳性菌株 F-M-2/OmpF 基因的克隆测序结果阳性菌株 F-M-2/OmpF 基因的克隆测序结果见图3-2：
注：右上角为 OmpF 同源性比较，左下角为 OmpF 差异性比较。图 3-4 OmpF 基因同源性分析Fig 3-4 The homology analysis of OmpF genes显示阳性菌株 F-M-2 与 GENBANK 中登录号为 CP003301，U00096.3 等同源性近。3.4 OmpF 蛋白预测分析3.4.1 OmpF 蛋白质疏水性分析登录 http://web.expasy.org/protscale/，对 OmpF 蛋白质疏水性分析。结果显示总均疏水指数为-0.49，为亲水性蛋白，见图 3-5：
本文编号：2961759
【文章来源】：云南农业大学云南省
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【部分图文】：
菌株F-M-2抑菌圈直径菌株F-M-2抑菌圈直径分别是：24mm（氯霉素），18mm（氨苄西林）
图3-1 菌株 F-M-2抑菌圈直径菌株 F-M-2抑菌圈直径分别是：24mm（氯霉素），18mm（氨苄西林）Fig 3-1 The antibacterial circle diameter of strain F-M-2The antibacterial circle diameter of strain F-M-2 is respectively：24mm（Chloramphenicol），18mm（Ampicillin）3.2 阳性菌株 F-M-2/OmpF 基因的克隆测序结果阳性菌株 F-M-2/OmpF 基因的克隆测序结果见图3-2：
注：右上角为 OmpF 同源性比较，左下角为 OmpF 差异性比较。图 3-4 OmpF 基因同源性分析Fig 3-4 The homology analysis of OmpF genes显示阳性菌株 F-M-2 与 GENBANK 中登录号为 CP003301，U00096.3 等同源性近。3.4 OmpF 蛋白预测分析3.4.1 OmpF 蛋白质疏水性分析登录 http://web.expasy.org/protscale/，对 OmpF 蛋白质疏水性分析。结果显示总均疏水指数为-0.49，为亲水性蛋白，见图 3-5：
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