猪链球菌真核样丝氨酸/苏氨酸激酶stk基因功能的实验研究
发布时间：2021-01-07 11:18
猪链球菌（Streptococcus suis,S.suis）是一种重要的人兽共患病病原菌,根据其表面荚膜多糖（Capsular polysaccharide, CPS）的抗原性,可以分为1/2、1-31和33共33个血清型,其中2型猪链球菌（Streptococcus suis serotype2,S.suis2）毒力最强,临床检出率最高。近年来多次出现S.suis2感染人事件,尤其是1998年和2005年,分别在江苏海安和四川资阳暴发了大规模的S.suis2感染人疫情,患者出现高比例的、国内外罕见的链球菌中毒性休克综合症（streptococcal toxic shock syndrome, STSS）症状,病情凶险,致死率高。然而猪链球菌的致病机制仍不清楚。信号转导系统是有机体对不断变化的外界环境做出反应的一个重要机制。在细菌中,磷酸化信号转导系统在这一过程中发挥着重要作用。对其深入的研究主要集中在二元信号转导系统（two-component signal transduction system,TCSTS）中,即组氨酸和天冬氨酸残基的磷酸化。随着基因组学研究的不断深入和分子生物...
【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
革兰氏阳性细菌中的丝氨酸/苏氨酸激酵丨
UA159、化脓链球菌SF370具有同源性。其中猪链球菌stk与上述四种菌编码基因的序列一致性分别为76%，73%, 74%，72%。吨与上述四种菌编码基因的序列一致性分别为69%，69%, 67%，66%。将STP/STK氨基在Pfam蛋白质家族数据库比对，结果表明猪链球菌STK为单次跨膜蛋N端激酶结构域和C端4个青霉素结合蛋白和丝氧酸/苏氨酸激酶相关结enicillin-binding protein and Ser/Thr kinase-associated domains, PASTA)。S内蛋白，属于金属依赖型磷酸_(metal-dependent phosphatase, PPM)家C亚家族（图2.2)。分别将STP、STK进行多重序列比对，从一级结构上出STP的氨基酸序列具有相似性，因此该蛋白具有一定的保守性。STK序列的相似程度很高，说明该蛋白的激酶结构域具有高度的保守性（图2.表2.2 stplstk基因注释结果CDS name CDS length GC in CDS (%) Strand Annotation05SSU0427 810 42.22 + Serine/threonine phosphat05SSU0428 1992 43.38 + Serine/threonine kinase
第2章2型猪链球菌stp-stk转录操纵子鉴定及STP活性鉴定ZYH33基因组对;操纵子的启动子区预测结果ROM在线工具预测stp和stk的启动子存在的可能基因区域。我们425上游150 bp片段内可能存在启动子区域。-对A:基因操纵子的实验鉴定别提取05ZYH33全基因组DNA，RNA, RT-PCR将RNA逆转录为cDF1/R1，F2/R2, F3/R3引物对进行PCR扩增。以基因组DNA为模出相应大小的DNA片段。以全菌RNA为模板，则扩增不出相应条取的RNA没有基因组DNA的污染。以RNA反转录得到的cDNA为增出相应条带，则证明了於P和以及上游的两个基因（分别编码NA-甲醜基转移酶和胞啼徒-C5-甲基化酶）处于同一个转录操纵子内
【参考文献】：
期刊论文
[1]真核样丝氨酸/苏氨酸激酶在链球菌中的研究进展[J]. 杜骁杰,潘秀珍. 中国病原生物学杂志. 2014(03)
[2]2型猪链球菌丝氨酸/苏氨酸磷酸酶重组蛋白的制备及鉴定[J]. 杜骁杰,郭静静,王晶,李敏,王玲,王长军,潘秀珍. 医学研究生学报. 2014(02)
[3]猪链球菌真核样丝氨酸/苏氨酸激酶stk基因敲除株的构建[J]. 杜骁杰,王玲,郑峰,李敏,王晶,胡丹,李先富,王长军,潘秀珍. 中国人兽共患病学报. 2013(12)
[4]2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33 sao基因敲除突变株的构建及其生物学功能[J]. 刘文静,潘秀珍,李先富,王长军,唐家琪. 微生物学通报. 2010(12)
[5]猪链球菌2型二元信号转导系统ciaR基因敲除突变株的构建及生物学功能研究[J]. 冯晓丹,程功,王晶,王长军,潘秀珍,唐家琪. 中国人兽共患病学报. 2009(03)
[6]细菌毒素-抗毒素系统的研究进展[J]. 王晓蕾,赵龙旋,张俊杰. 生物化学与生物物理进展. 2008(09)
[7]链霉菌真核型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的研究进展[J]. 杨旭,关东明,王胜兰,杨克迁. 微生物学报. 2008(01)
[8]远缘链球菌ftsK基因敲除菌株的构建[J]. 金涛,吴补领,苏凌云,高杰. 牙体牙髓牙周病学杂志. 2005(05)
本文编号：2962467
【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
革兰氏阳性细菌中的丝氨酸/苏氨酸激酵丨
UA159、化脓链球菌SF370具有同源性。其中猪链球菌stk与上述四种菌编码基因的序列一致性分别为76%，73%, 74%，72%。吨与上述四种菌编码基因的序列一致性分别为69%，69%, 67%，66%。将STP/STK氨基在Pfam蛋白质家族数据库比对，结果表明猪链球菌STK为单次跨膜蛋N端激酶结构域和C端4个青霉素结合蛋白和丝氧酸/苏氨酸激酶相关结enicillin-binding protein and Ser/Thr kinase-associated domains, PASTA)。S内蛋白，属于金属依赖型磷酸_(metal-dependent phosphatase, PPM)家C亚家族（图2.2)。分别将STP、STK进行多重序列比对，从一级结构上出STP的氨基酸序列具有相似性，因此该蛋白具有一定的保守性。STK序列的相似程度很高，说明该蛋白的激酶结构域具有高度的保守性（图2.表2.2 stplstk基因注释结果CDS name CDS length GC in CDS (%) Strand Annotation05SSU0427 810 42.22 + Serine/threonine phosphat05SSU0428 1992 43.38 + Serine/threonine kinase
第2章2型猪链球菌stp-stk转录操纵子鉴定及STP活性鉴定ZYH33基因组对;操纵子的启动子区预测结果ROM在线工具预测stp和stk的启动子存在的可能基因区域。我们425上游150 bp片段内可能存在启动子区域。-对A:基因操纵子的实验鉴定别提取05ZYH33全基因组DNA，RNA, RT-PCR将RNA逆转录为cDF1/R1，F2/R2, F3/R3引物对进行PCR扩增。以基因组DNA为模出相应大小的DNA片段。以全菌RNA为模板，则扩增不出相应条取的RNA没有基因组DNA的污染。以RNA反转录得到的cDNA为增出相应条带，则证明了於P和以及上游的两个基因（分别编码NA-甲醜基转移酶和胞啼徒-C5-甲基化酶）处于同一个转录操纵子内
【参考文献】：
期刊论文
[1]真核样丝氨酸/苏氨酸激酶在链球菌中的研究进展[J]. 杜骁杰,潘秀珍. 中国病原生物学杂志. 2014(03)
[2]2型猪链球菌丝氨酸/苏氨酸磷酸酶重组蛋白的制备及鉴定[J]. 杜骁杰,郭静静,王晶,李敏,王玲,王长军,潘秀珍. 医学研究生学报. 2014(02)
[3]猪链球菌真核样丝氨酸/苏氨酸激酶stk基因敲除株的构建[J]. 杜骁杰,王玲,郑峰,李敏,王晶,胡丹,李先富,王长军,潘秀珍. 中国人兽共患病学报. 2013(12)
[4]2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33 sao基因敲除突变株的构建及其生物学功能[J]. 刘文静,潘秀珍,李先富,王长军,唐家琪. 微生物学通报. 2010(12)
[5]猪链球菌2型二元信号转导系统ciaR基因敲除突变株的构建及生物学功能研究[J]. 冯晓丹,程功,王晶,王长军,潘秀珍,唐家琪. 中国人兽共患病学报. 2009(03)
[6]细菌毒素-抗毒素系统的研究进展[J]. 王晓蕾,赵龙旋,张俊杰. 生物化学与生物物理进展. 2008(09)
[7]链霉菌真核型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的研究进展[J]. 杨旭,关东明,王胜兰,杨克迁. 微生物学报. 2008(01)
[8]远缘链球菌ftsK基因敲除菌株的构建[J]. 金涛,吴补领,苏凌云,高杰. 牙体牙髓牙周病学杂志. 2005(05)
本文编号：2962467
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