河南地区猪细小病毒的分离鉴定及免疫原性研究

发布时间：2021-01-07 20:25

　　猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）属细小病毒科、细小病毒属。是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一。主要表现为初产母猪流产,胎儿和胚胎的感染和死亡,产出死胎、畸形胎、木乃伊胎及病弱仔猪等,而受感染母猪本身通常并不表现临床症状。仔猪会出现生长受阻,偶有皮炎和腹泻症状。感染公猪则表现为精液品质下降。PPV又常同猪伪狂犬病病毒（PRV）、乙型脑炎病毒（JEV）、猪圆环病毒（PCV）、猪瘟（CSFV）、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）等混合感染而加重了其危害。PPV感染普遍存在于世界各地的猪群中,严重影响和制约着养猪业的发展。PPV自二十世纪六十年代被发现以来,许多国家先后分离到该病毒和检测到其抗体,抗体检出率为50%～80%,其中我国高达80%。近年来,PPV感染和造成的危害呈上升趋势,给养猪业造成了巨大的经济损失。本试验从采集疑似感染PPV的病料中分离出了 4株PPV,进行了全基因组测序及相关生物学特性研究,并对PPV的灭活条件进行了探索,对河南地区分离株进行豚鼠免疫试验,以期为临床上该病的防治提供试验依据。本实验从流产死胎及木乃伊胎中分离出了 4株PPV病毒,... 

【文章来源】：河南农业大学河南省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－丨组织病料中ＰＰＶ的ＰＣＲ扩增结果??Ｆｉ．?１－１?ＰＣＲ?ａｍｌｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＰＰＶ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｏｒａｎｓ??

＿．ｘ．ｔｐ?—??ｌＣＣｂｐ?—??图１－丨组织病料中ＰＰＶ的ＰＣＲ扩增结果??Ｆｉｇ．?１－１?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＰＰＶ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｏｒｇａｎｓ??Ｍ．?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００：?１．?ＰＰＶ检测引物的ＰＣＲ扩增产物；２．阴性对照??Ｍ．?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００；?１．?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＰＰＶ：?２．?Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??阳性克隆测序结果表明ＰＣＲ扩增片段长度为１９５?ｂｐ，与预期结果相符合。将阳性片段序??列与ＧｅｎＢａｎｋ中已发表的多株猪细小病毒序列进行核苷酸同源性比较后，发现同源性可达到??１００％。测序结果如下：??ＣＣＡＡＡＡＡＴＧＣＡＡＡＣＣＣＣＡＡＴＡＡＡＴＡＣＡＣＣＡＡＣＡＧＡＣＴＣＴＣＡＧＡＴＴＴＣＣＡＣＡＴＣＡＧ??ＴＧＡＡＡＡＣＴＴＣＧＣＣＡＧＣＧＧＡＣＡＡＣＡＡＣＴＡＣＧＣＡＧＣＡＡＣＴＣＣＡＡＴＡＣＡＧＧＡＧＧＡＣＣＴＧＧ??ＡＴＴＴＡＧＣＴＴＴＡＧＣＣＴＴＧＧＡＧＣＣＧＴＧＧＡＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＣＣＡＡＣＴＴＴＣＡＣＣＡＡＣＣＴ??ＧＣＡＣＴＴＡＡＣＴＣＣＡＡＣＡＣＣＧＣＣＡＧＡＴ??２．２?ＰＰＶ分离株的分离培养与细胞病变观察??将处理后的病料接种于ＳＴ细胞，盲传至第５代细胞出现轻微的ＣＰＥ，第１０代时细胞??出现了较稳定的ＣＰＥ？正常的ＳＴ细胞紧密地贴壁生长，接毒第１０代后细胞内颗粒增多，??随后出现病毒蚀斑，蚀斑周围细胞圆缩，接着大片脱落，细胞拉网，很多细胞发生裂解、破??碎

２．６间接免疫焚光鉴定结果??将ＰＰＶ分离株的细胞毒做适当处理后，按照常规免疫荧光操作方法。可在倒置荧光显??微镜下看到细胞核或胞浆内呈闪亮苹果绿色颗粒型荧光（图１４）：??１９??

【参考文献】：
期刊论文
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[4]猪细小病毒研究现状及综合防控[J]. 杨作丰.  现代畜牧兽医. 2013(03)
[5]猪细小病毒的分离与鉴定[J]. 魏春华,刘建奎,戴爱玲,杨小燕.  中国畜牧兽医. 2012(10)
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博士论文
[1]猪细小病毒非结构蛋白NS1和结构蛋白VP2的研究[D]. 卿柳庭.华中农业大学 2005

硕士论文
[1]猪细小病毒河南流行株的分离、鉴定及部分生物学特性研究[D]. 顾帅.河南农业大学 2011
[2]猪伪狂犬病、细小病毒病和乙型脑炎三联灭活疫苗的研制[D]. 何永龙.华中农业大学 2010
[3]河南株PPV的分离鉴定及VP2基因的克隆与序列分析[D]. 王宏魁.河南农业大学 2009
[4]猪细小病毒分离株感染母猪及胎猪的体内组织分布及病理变化[D]. 苗岚飞.东北农业大学 2009
[5]猪细小病毒NS1与VP2基因的研究[D]. 苏晓健.河北农业大学 2007
[6]猪细小病毒SR-1株全基因测序研究[D]. 张宇.四川农业大学 2006
[7]猪细小病毒（PPV-SC1）的分离、鉴定及其非结构蛋白NS1基因的克隆和序列分析[D]. 殷华平.四川农业大学 2004



本文编号：2963187