抗猪流行性腹泻纳米纤维素单链抗体的构建、高效表达及制备

发布时间：2021-01-07 22:55

　　猪流行性腹泻近年来的频繁爆发及哺乳仔猪的高致死率不仅为猪养殖产业带来巨大经济损失,同时也说明依赖主动免疫发挥作用的传统疫苗（灭活疫苗、活疫苗等）对哺乳仔猪并无明显效果,因此采用基因工程手段研制新型疫苗对猪流行性腹泻的治疗有积极意义。7-14日龄及以下仔猪免疫系统的不完善证明仔猪被动免疫的迫切性,因此本研究利用基因工程手段制备并检测可用于口服的抗体。本研究在实验室已有抗PEDV COE蛋白单链抗体sc Fv基因的基础上,将单链抗体sc Fv序列在进行大肠杆菌原核表达优化的同时在序列翻译5’端加入一段纤维素结合结构域（cellμLose binding domain,CBD）序列,然后构建原核表达载体p ET19B-CBD-sc Fv。并对BL21/p ET19BCBD-sc Fv的摇菌条件进行优化,研究了温度、IPTG诱导剂量、诱导时间长度等因素对菌体生长和蛋白表达量的影响。采用硫酸水解法制备纳米纤维素,50g纤维素纸加入500m L 64%的硫酸中,45℃水浴1h,反应产物加入2.5L去离子水终止反应后离心、透析、超声后采用热干燥法测所得纳米纤维素浓度;将复性后CBD-sc Fv蛋白与... 

【文章来源】：河南农业大学河南省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PCR扩增目的基因CBD-scFvNdeI、BanmHI双酶切鉴定

D-scFv 由生工生物科技公司合成并进行大肠杆菌表达密码子优质粒 pUC-sp-CBD-scFv 为模板 PCR 克隆出长度为 1101bp的 Cv 与质粒 pET19b 同时进行 Nde I和 BanmH I双酶切酶切，经过9bp 的酶切片段 CBD-scFv（图 2）和长度为 5705bp 的线性质粒图 2 PCR扩增目的基因 CBD-scFv Nde I 、BanmH I 双酶切鉴定M:DL2000 DNA 分子量标准；1,2,3： Nde I 、BanmH I 双酶切 CBD-scFvFig.2 double enzyme digestion of CBD-scFvM: DL2000 DNA marker;1,2,3: Nde I 、BanmH I digestion of CBD-scFv

pET19b-CBD-scFv 酶切鉴定目的基因 CBD-scFv 分别进行双酶切后连接转化大肠杆菌感受态，挑CR 鉴定为阳性的单克隆菌株提取质粒并进行 EcoR I单酶切与 Bgl I粒全长为 6792bp，双酶切结果理论条带长度为 1259bp和 5533bp。792bp 的单一条带与长为 1259bp和 5533bp 的双酶切条带（图 4）。生物公司测序。

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：2963399