重组牛IFN-λ3的制备及其与IFN-α/IFN-β/IFN-γ抗病毒活性比较研究
发布时间：2021-01-08 02:03
干扰素（Interferon，IFN）是由动物细胞产生的，具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等作用的一类细胞因子。IFN分为I型、II型和新发现的III型，III型干扰素又称为IFN-λs，其氨基酸水平和蛋白质功能与I型相近。由于IFN-λs受体组织分布特异性，IFN-λs主要在呼吸道、消化道和皮肤黏膜组织以及上皮细胞或某些肿瘤细胞发挥抗病毒作用，与IFN-α相比，能够有效地降低毒副作用。在我国，奶牛病毒性传染病如口蹄疫（FMD）、牛病毒性腹泻病（BVD）和牛传染性鼻气管炎（IBR）等可通过消化道、呼吸道传播的疫病，至今危害仍比较严峻，因此牛IFN-λs成为继IFN-α和IFN-β后，抗病毒制剂研发的一个方向。为深入研究牛IFN-λs的抗病毒活性及其机制，揭示其用于防治牛病毒病的可行性，本研究利用毕赤酵母分泌表达系统表达了无冗余氨基酸的重组牛IFN-λ3，同时酵母分泌表达了重组牛IFN-α和IFN-β，大肠杆菌表达系统表达了重组牛IFN-β和IFN-γ，深入研究了各重组干扰素的抗病毒活性，比较了IFN-λ3与I型和II型干扰素单独或联合应用抗病毒活性的异同，主要研究内容如下：1.首先在毕赤酵...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
干扰素信号转导JAK-STAT经典途径（摘自RaymondP.Donnelly，2010[25]
7图 1-2 干扰素信号转导途径（摘自 Mingcai Li，2009[26]）Figure 1-2 Signaling pathways of IFNs, which activate STAT-dependent and -independentpathways
激活 RNase L 后，降解细胞和病毒 RNA，抑制病毒相关蛋白分子的合成，从而抑制病毒增殖[61]。基于 2”5’-OAS 主要在胞浆发挥作用的活性特点，其在抗脑心肌炎病毒（EMCV和艾滋病毒（HIV-l）等在胞浆中增殖复制的病毒感染中发挥重要作用，而对于在胞核复制的病毒，如水泡性口腔炎病毒（VSV）和单纯疙疹病毒（HSV）等，可能没有作用[62]。4）Mx1粘病毒抗性蛋白 1（myxovirus resistanceprotein 1，Mx1，也称为 MxA 蛋白），Mx1 蛋白属于动力超家族蛋白分子成员，其特征为具有内在的三磷酸鸟苷类活性即 GTPase 活性和在细胞内形成高分子量的低聚物，其 GTPase 区域位于 N-端，动力样结构、含有亮氨酸拉链基序的 GTP 活性结构域（GED）位于 C-端。其主要作用为抗病毒活性，其他如细胞内空泡转运和细胞器动态平衡也与该蛋白有一定的关系。其对正黏病毒和副黏病毒等大多数病毒包括DNA 病毒（如麻疹病毒、流感病毒、水泡性口炎病毒、乙型肝炎病毒等）均较为敏感[63-65]。对病毒的增殖位点要求不严格，是 IFN 介导抗病毒作用的关键成份。到目前为止其抗病毒机制尚未完全了解也很难界定它主要抑制病毒复制的那个环节，推测的可能抗病毒机制是 Mx识别病毒核衣壳，通过形成 Mx1-核衣壳复合物使病毒成份运送错误，进而逐渐使病毒丧失感染力[47, 66]。
【参考文献】：
期刊论文
[1]信号肽与分泌通路在毕赤酵母表达异源蛋白中的作用机制[J]. 张勇,毛若雨,胡小媛,滕达,王秀敏,王建华,王安如. 中国饲料. 2013(01)
[2]内含肽和麦芽糖结合蛋白介导具有抗病毒活性牛α干扰素的表达[J]. 崔子寅,王艺萌,唐博,孙旭燕,高明春,王君伟. 中国兽医科学. 2012(05)
[3]杆状病毒介导外源基因在哺乳动物细胞中表达的研究进展[J]. 田飞鹏,曹轶梅,卢曾军,高云英,刘在新. 微生物学通报. 2009(12)
[4]牛β-干扰素在新城疫病毒La Sota疫苗株中的高效稳定表达及抗病毒活性检测[J]. 葛金英,解希帝,丁玉林,曹有才,毛伟,刘娣,步志高. 黑龙江畜牧兽医. 2009(19)
[5]牛IFN-α基因高效表达及纯化的研究[J]. 孙仰峰,李文辉,李勐,高明春,王薇,魏双施,王君伟. 中国预防兽医学报. 2008(11)
[6]毕赤酵母N-糖基化改造的研究进展[J]. 张倩,宋海峰. 中国新药杂志. 2008(14)
[7]重组杆状病毒表达牛β干扰素及其生物学活性研究[J]. 陈伟业,肇慧君,王喜军,黄克和,步志高,曹文雁,葛金英,温志远. 微生物学报. 2007(06)
[8]重组鲁西黄牛α干扰素融合蛋白的表达及其抗病毒活性研究[J]. 张永红,王长法,杨少华,高运东,王洪梅,李景鹏,仲跻峰. 生物工程学报. 2007(04)
[9]牛IFN-γ原核表达、单克隆抗体制备及其ELISA检测方法的建立[J]. 李川,谭亚娣,陈颖钰,胡巧云,马艳,张桂荣,钦博,晁彦杰,陈焕春,郭爱珍. 生物工程学报. 2007(01)
[10]牛γ-干扰素在牛结核检测中的研究应用[J]. 李彤,张以芳,罗佳琴. 中国畜牧兽医. 2006(11)
本文编号：2963690
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
干扰素信号转导JAK-STAT经典途径（摘自RaymondP.Donnelly，2010[25]
7图 1-2 干扰素信号转导途径（摘自 Mingcai Li，2009[26]）Figure 1-2 Signaling pathways of IFNs, which activate STAT-dependent and -independentpathways
激活 RNase L 后，降解细胞和病毒 RNA，抑制病毒相关蛋白分子的合成，从而抑制病毒增殖[61]。基于 2”5’-OAS 主要在胞浆发挥作用的活性特点，其在抗脑心肌炎病毒（EMCV和艾滋病毒（HIV-l）等在胞浆中增殖复制的病毒感染中发挥重要作用，而对于在胞核复制的病毒，如水泡性口腔炎病毒（VSV）和单纯疙疹病毒（HSV）等，可能没有作用[62]。4）Mx1粘病毒抗性蛋白 1（myxovirus resistanceprotein 1，Mx1，也称为 MxA 蛋白），Mx1 蛋白属于动力超家族蛋白分子成员，其特征为具有内在的三磷酸鸟苷类活性即 GTPase 活性和在细胞内形成高分子量的低聚物，其 GTPase 区域位于 N-端，动力样结构、含有亮氨酸拉链基序的 GTP 活性结构域（GED）位于 C-端。其主要作用为抗病毒活性，其他如细胞内空泡转运和细胞器动态平衡也与该蛋白有一定的关系。其对正黏病毒和副黏病毒等大多数病毒包括DNA 病毒（如麻疹病毒、流感病毒、水泡性口炎病毒、乙型肝炎病毒等）均较为敏感[63-65]。对病毒的增殖位点要求不严格，是 IFN 介导抗病毒作用的关键成份。到目前为止其抗病毒机制尚未完全了解也很难界定它主要抑制病毒复制的那个环节，推测的可能抗病毒机制是 Mx识别病毒核衣壳，通过形成 Mx1-核衣壳复合物使病毒成份运送错误，进而逐渐使病毒丧失感染力[47, 66]。
【参考文献】：
期刊论文
[1]信号肽与分泌通路在毕赤酵母表达异源蛋白中的作用机制[J]. 张勇,毛若雨,胡小媛,滕达,王秀敏,王建华,王安如. 中国饲料. 2013(01)
[2]内含肽和麦芽糖结合蛋白介导具有抗病毒活性牛α干扰素的表达[J]. 崔子寅,王艺萌,唐博,孙旭燕,高明春,王君伟. 中国兽医科学. 2012(05)
[3]杆状病毒介导外源基因在哺乳动物细胞中表达的研究进展[J]. 田飞鹏,曹轶梅,卢曾军,高云英,刘在新. 微生物学通报. 2009(12)
[4]牛β-干扰素在新城疫病毒La Sota疫苗株中的高效稳定表达及抗病毒活性检测[J]. 葛金英,解希帝,丁玉林,曹有才,毛伟,刘娣,步志高. 黑龙江畜牧兽医. 2009(19)
[5]牛IFN-α基因高效表达及纯化的研究[J]. 孙仰峰,李文辉,李勐,高明春,王薇,魏双施,王君伟. 中国预防兽医学报. 2008(11)
[6]毕赤酵母N-糖基化改造的研究进展[J]. 张倩,宋海峰. 中国新药杂志. 2008(14)
[7]重组杆状病毒表达牛β干扰素及其生物学活性研究[J]. 陈伟业,肇慧君,王喜军,黄克和,步志高,曹文雁,葛金英,温志远. 微生物学报. 2007(06)
[8]重组鲁西黄牛α干扰素融合蛋白的表达及其抗病毒活性研究[J]. 张永红,王长法,杨少华,高运东,王洪梅,李景鹏,仲跻峰. 生物工程学报. 2007(04)
[9]牛IFN-γ原核表达、单克隆抗体制备及其ELISA检测方法的建立[J]. 李川,谭亚娣,陈颖钰,胡巧云,马艳,张桂荣,钦博,晁彦杰,陈焕春,郭爱珍. 生物工程学报. 2007(01)
[10]牛γ-干扰素在牛结核检测中的研究应用[J]. 李彤,张以芳,罗佳琴. 中国畜牧兽医. 2006(11)
本文编号：2963690
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