绵羊副流感病毒3型PE2019株的分离与鉴定

发布时间：2021-01-08 09:33

　　为了确定引起绵羊呼吸道传染病的病原,本研究于2019年对一患急性呼吸道疾病死亡绵羊的病料进行了病毒分离,从其胸腔积液中分离到一株绵羊副流感病毒3型（OPIV3）,命名为PE2019株。该病毒能够在MDBK细胞上增殖,产生细胞圆缩、集聚成簇等为特征的细胞病变;电子显微镜观察可见OPIV3 PE2019株为直径约300 nm的圆形粒子;经检测该分离株病毒滴度为10^7.8TCID₅₀/mL。分离株对小鼠和豚鼠的红细胞血凝价均为164,不凝集鸡、兔、绵羊和牛的红细胞。参考山羊副流感病毒3型全基因组序列（MK091103）,设计其N和M基因特异性引物,通过RT-PCR可从病毒细胞培养物中扩增到特异性片段,对其进行序列分析,结果显示,分离株N基因序列与山羊、牛和人副流感病毒3型参考株的基因同源性分别为84.0%、82.1%和78.8%,M基因序列与山羊、牛和人副流感病毒3型参考株的基因同源性分别为81.5%、78.4%和77.6%,OPIV3 N和M基因均为独立一个分支。本研究首次于国内分离到OPIV3,为了解国内OPIV3的流行情况及疫苗的研制奠定了基... 

【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(05)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

病毒分离株PE2019在MDBK上的CPE

病毒分离株PE2019接种MDBK细胞上清，经电镜负染观察可见带有囊膜、圆形、直径约300 nm的病毒粒子（图2）；此外，可观察到病毒基因组释放出核衣壳呈长丝带状，与副黏病毒病毒粒子形态特征相符，进一步证明分离株为副黏病毒。2.4 血凝试验结果

病毒分离株PE2019 F3代病毒均不凝集鸡、兔、绵羊和牛的0.5%红细胞，但对小鼠和豚鼠的0.5%红细胞凝集效价均为26，凝集价较高。2.5 RT-PCR鉴定及序列分析结果提取分离株PE2019基因组RNA，用NF引物进行反转录，再用N和M基因特异性引物进行PCR扩增，结果获得分别约750 bp和1 200 bp的目的片段（图3）。对分离株PE2019的N和M基因进行序列测定，截取N基因的680 bp的部分基因和M基因全长1 059 bp，与GenBank中登录的CPIV3、BPIV3和HPIV3的不同参考株序列进行核苷酸序列同源性分析。结果显示，N基因序列同源性与3类病毒中参考株最高分别为84.0%、82.1%和78.8%,M基因序列同源性与3类病毒中参考株最高分别为81.5%、78.4%和77.6%，且N和M基因均为独立一个分支（图4）。表明分离株为PIV3，但与CPIV3、BPIV3和HPIV3均亲缘关系较远，为一新的病毒株，由于分离株是从绵羊体内分离获得，故将分离株确定为OPIV3。

【参考文献】：
期刊论文
[1]广西部分地区山羊源副流感病毒3型的血清学调查[J]. 闭璟珊,王卫雪,韦显凯,苏姣秀,郑敏.  黑龙江畜牧兽医. 2018(06)
[2]山羊副流感病毒3型人工感染山羊的致病性[J]. 郝飞,李文良,毛立,杨蕾蕾,张纹纹,江杰元.  中国兽医学报. 2016(12)
[3]山羊源副流感病毒3型的分离与分子鉴定[J]. 李文良,毛立,程素平,王秋生,黄加春,张纹纹,杨蕾蕾,江杰元.  畜牧兽医学报. 2015(02)



本文编号：2964358