RBP4调控猪前体脂肪细胞分化的机制研究

发布时间：2021-01-08 15:28

　　脂肪细胞的分化是极其复杂的生物学过程,在受到一系列转录因子级联调控的同时,各种细胞因子也能够通过复杂的信号转导,参与启动和调控脂肪细胞的分化和维持细胞特性。作为机体重要的内分泌器官之一,脂肪组织分泌的脂肪细胞因子对脂肪细胞的形成发挥着关键的调控作用。经研究证实,脂肪细胞因子的功能性紊乱会导致肥胖和胰岛素抵抗（Insulin Resistance, IR）等相关代谢疾病。除此之外,脂肪细胞因子还能参与调节家畜体脂沉积和肌肉发育等肉质性状。因此,深入研究脂肪细胞因子作用的分子机理,已成为阐明脂肪组织形成的重要组成部分,并对畜牧业生产的肉质改良有着重要意义。RBP4属于脂质运载蛋白家族成员,是视黄醇（维生素A）的特定转运蛋白。RBP4将肝脏储存的视黄醇转运到其他外周组织,并协助视黄醇发挥生理功能。研究发现RBP4作为脂肪细胞因子,能够参与调控脂肪细胞的葡萄糖吸收,并在机体IR中发挥重要作用。RBP4的新功能推动了病理与生理机制、脂肪细胞因子与炎症反应之间关系的探讨,使其成为药物开发的新靶标。但目前有关RBP4对脂肪细胞分化的机理研究相对较少。动物脂肪沉积与肌肉发育实验室前期研究发现,RBP4... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：88 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
文献综述
    前言
    第一章 脂肪细胞形成的调节因子
        1.1 转录调控因子
            1.1.1 PPARγ
            1.1.2 C/EBPs
            1.1.3 其他转录因子
        1.2 脂肪细胞因子
            1.2.1 Adiponectin
            1.2.2 Leptin
            1.2.3 Resistin
            1.2.4 Interleukin-6
    第二章 RBP4的研究进展
        2.1 RBP基因简介
            2.1.1 RBP的基因结构
            2.1.2 RBP的作用机制
        2.2 RBP4的生物学功能
            2.2.1 RBP4简介及其新功能的发现
            2.2.2 RBP4与肥胖和胰岛素抵抗的研究
            2.2.3 RBP4与代谢综合症的研究
            2.2.4 RBP4在人脂肪细胞中的研究
实验研究
    前言
    第三章 实验材料与实验方法
        3.1 试剂配制
            3.1.1 细胞培养用试剂
            3.1.2 生化实验用试剂
            3.1.3 蛋白检测用试剂
        3.2 实验材料
            3.2.1 细胞来源
            3.2.2 载体
            3.2.3 抑制剂
        3.3 实验方法
            3.3.1 BJ5183感受态细胞的制备
            3.3.2 pAd-RBP4超表达载体的构建及病毒包装
            3.3.3 pLentiH1-RBP4 shRNA干扰载体的构建及病毒包装
            3.3.4 病毒滴度测定
            3.3.5 RNA提取和反转录
            3.3.6 Real-time quantitative PCR
            3.3.7 Western blot
            3.3.8 免疫荧光
            3.3.9 BODIPY和油红O染色
            3.3.10 免疫共沉淀
            3.3.11 冰冻切片的制备
            3.3.12 冰冻切片HE染色
            3.3.13 冰冻切片IF染色
            3.3.14 其他操作步骤
        3.4 数据分析
    第四章 RBP4在猪脂肪细胞中的表达模式分析
        4.1 材料与方法
        4.2 实验结果
            4.2.1 RBP4随猪前体脂肪细胞分化表达增加
            4.2.2 RBP4在猪成熟脂肪细胞中高表达
        4.3 讨论
        4.4 小结
    第五章 超表达RBP4对猪前体脂肪细胞分化的影响
        5.1 实验材料与方法
        5.2 实验结果
            5.2.1 RBP4重组腺病毒表达载体的构建及鉴定
            5.2.2 RBP4重组腺病毒的包装、扩繁及滴度测定
            5.2.3 Ad-RBP4感染猪前体体脂肪细胞的效果
            5.2.4 超表达RBP4抑制猪前体脂肪细胞体外分化
            5.2.5 超表达RBP4影响猪脂肪细胞脂解基因的表达
        5.3 讨论
        5.4 小结
    第六章 干扰RBP4对猪前体脂肪细胞分化的影响
        6.1 实验材料与方法
        6.2 实验结果
            6.2.1 重组慢病毒干扰载体构建及鉴定
            6.2.2 RBP4重组慢病毒的包装、扩繁及滴度测定
            6.2.3 pLentiH1-RBP4 shRNA感染猪前体脂肪细胞效果
            6.2.4 干扰RBP4促进猪前体脂肪细胞分化
        6.3 讨论
        6.4 小结
    第七章 RBP4调节insulin信号通路的作用机制
        7.1 实验材料与方法
        7.2 实验结果
            7.2.1 RBP4对猪前体脂肪细胞相关信号通路因子的影响
            7.2.2 insulin诱导RBP4蛋白表达并激活insulin信号通路
            7.2.3 抑制剂LY294002处理浓度和时间的筛选
            7.2.4 干扰RBP4可以缓解LY294002的作用
            7.2.5 RBP4能够与AKT形成复合物
        7.3 讨论
        7.4 小结
    第八章 RBP4对小鼠腹部脂肪组织的影响
        8.1 实验材料与方法
        8.2 技术路线
        8.3 实验结果
            8.3.1 Ad-RBP4可增加小鼠腹脂中RBP4的表达
            8.3.2 RBP4影响小鼠腹脂沉积速度
            8.3.3 RBP4影响小鼠腹脂细胞大小
            8.3.4 RBP4可引起小鼠腹脂的胰岛素抵抗
        8.4 讨论
        8.5 小结
结论
创新点
后续研究
参考文献
附录
缩略词表
致谢
作者简介


【参考文献】：
博士论文
[1]RBP4作为核受体辅活化子新功能的研究[D]. 陈健.第三军医大学 2004



本文编号：2964839