基于极大倾角石墨烯光纤光栅生物传感器的禽流感快速检测方法研究
发布时间：2021-01-08 21:08
禽流感（avian influenza,AI）由正粘病毒科A型流感病毒引起的全身性传染病,国际兽疫局（OIE）将其定为A类传染病,不仅严重危害养禽业,而且给公共卫生造成巨大威胁,因此国家将防治禽流感作为重要任务。目前,对禽流感的主要检测技术有血凝-血凝抑制（HA-HI）试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、聚合酶链式反应（PCR）和胶体金等方法。前者比较敏感,但受外界因素影响较大而削弱了其实用价值;ELISA适合于大批量血清学调查,但因其条件要求高,现场操作不便;PCR虽然可直接检出病毒的基因,但所需的设备昂贵,在临床检测方面受到了很大的限制;胶体金方法目前国内、外均有相关的产品问世,但其检测灵敏度不高,只能定性,不能定量,该方法只能用于疫病诊断的辅助检测。因此探索高效、特异、准确的检测手段对于禽流感的防控具有十分重要的意义。现有的禽流感血清学检测技术主要利用抗原抗体的反应,而目前国内禽流感病毒抗体产品质量参差不齐,国外已有比较成熟的商品化抗体,抗体试剂主要依赖于进口,但价格较昂贵。制备高效价、低成本、特异性强的单克隆抗体可为禽流感的防控提供必备的试剂原料。极大角度光纤光栅（exces...
【文章来源】：重庆理工大学重庆市
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AIV病毒结构图
图 2.1 pET28a（+）/HA 重组质粒的双酶切鉴定M1-M2: DNA 分子质量标准；1-2: pET28a(+)/HA 双酶切产物Fig.2.1 Double enzyme digestion of pET28a (+) /HA recombinant plasmiM1-M2: DNA marker; 1-2: pET28a (+)/HA double enzyme digestion produc质粒的可溶性表达验证T28a(+)/HA 工程菌按照相关技术要求进行试表达，采用文献资进行诱导表达后，将菌体超声波裂菌，离心取上清，将沉淀混PAGE 检测。结果表明，发现在 70KD 处有明显的蛋白条带，带，而且在 IPTG 为 0.5mmol/L 诱导 8h 时所试所有温度下上，为可溶性表达，结果如图 2.2 所示。
图 2.2 HA 重组蛋白 SDS-PAGE 分析质分子质量标准；1: pET28a(+)空载体；2. 20℃上清；3. 20℃沉淀；4. 25℃上清沉淀；6. 30℃上清；7. 30℃沉淀；8. 37℃上清；9. 37℃沉淀；Fig.2.2 Analysis of recombinant HA protein by SDS-PAGE: Protein molecular marker; 1: pET28a(+) vector；2: Expresse supernatant 20 ℃; 3ecipitation 20 ℃; 4: Expresse supernatant 25 ℃; 5: Express precipitation 25 ℃; 6: upernatant 30 ℃; 7: Express precipitation 30 ℃; 8: Expresse supernatant 37 ℃; 9: precipitation 37℃;选重组菌株最佳诱导条件要影响蛋白表达三组因素，利用控制变量实验法对诱导温度、诱导诱导时间做逐次筛查，探索出 HA 重组蛋白的最佳诱导条件为 30mol/L，诱导时间 10h 。）加入适量的 1mmol/LIPTG，将 4 支试管分别放置于 20℃、25℃、
【参考文献】：
期刊论文
[1]H5亚型流感病毒HA头部球状结构域在毕赤酵母中的高效表达及其免疫原性分析[J]. 范文辉,王萌,刘丽蓉,张鹤,张爽,凌红丽,刘文军,李晶. 生物工程学报. 2019(01)
[2]逆转录环介导等温扩增技术检测H7N9禽流感病毒基因[J]. 张锦海,陈文琦,韩一芳,张琪,叶福强,王太武,陈乐如,王长军. 东南国防医药. 2019(01)
[3]禽流感病毒H7亚型竞争ELISA抗体检测方法的建立[J]. 范俊青,魏燕鸣,邹忠,李冉,孙小美,金梅林. 养殖与饲料. 2019(01)
[4]氧化石墨烯的制备及其在生物传感器中的应用进展[J]. 裴新月,樊璨,王诗. 湖北科技学院学报(医学版). 2018(06)
[5]H5N8亚型流感病毒双重实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价[J]. 孙洁,廖立珊,于力,吴绍精,刘建利,陶虹,杨俊兴,曾少灵,林彦星,黄超华,林庆燕,秦智锋. 上海畜牧兽医通讯. 2018(06)
[6]45°倾斜光纤光栅波长可调谐调Q光纤激光器[J]. 胡啸林,闫志君,黄千千,邹传杭,王天行,牟成博. 光电工程. 2018(10)
[7]基于45°倾斜光栅的重复频率可切换被动谐波锁模光纤激光器[J]. 凌远达,黄千千,邹传杭,闫志君,牟成博. 红外与激光工程. 2018(08)
[8]倾斜光纤光栅传感器[J]. 郭团,刘甫,邵理阳. 应用科学学报. 2018(01)
[9]流感病毒M1与NA蛋白的相互作用及其在病毒出芽中的作用[J]. 包旦奇,侯天龙,李泽君,刘芹防,张七斤. 中国动物传染病学报. 2017(05)
[10]一种基于液相基因芯片技术对甲型和乙型流感病毒分型检测方法的建立[J]. 陈锦龙,吕刚,张优,符瑞佳,尹飞飞. 分子诊断与治疗杂志. 2017(05)
博士论文
[1]基于氧化石墨烯的光学生化传感检测研究[D]. 张倩.浙江大学 2017
硕士论文
[1]倾斜光纤光栅的谱特性与折射率传感特性研究[D]. 高久鹏.南京邮电大学 2017
[2]基于81°倾斜光栅的光纤传感器理论和实验的研究[D]. 舒慧.电子科技大学 2016
[3]常见流感病毒分型基因芯片检测方法的建立和应用[D]. 王斗.北京工业大学 2013
本文编号：2965300
【文章来源】：重庆理工大学重庆市
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AIV病毒结构图
图 2.1 pET28a（+）/HA 重组质粒的双酶切鉴定M1-M2: DNA 分子质量标准；1-2: pET28a(+)/HA 双酶切产物Fig.2.1 Double enzyme digestion of pET28a (+) /HA recombinant plasmiM1-M2: DNA marker; 1-2: pET28a (+)/HA double enzyme digestion produc质粒的可溶性表达验证T28a(+)/HA 工程菌按照相关技术要求进行试表达，采用文献资进行诱导表达后，将菌体超声波裂菌，离心取上清，将沉淀混PAGE 检测。结果表明，发现在 70KD 处有明显的蛋白条带，带，而且在 IPTG 为 0.5mmol/L 诱导 8h 时所试所有温度下上，为可溶性表达，结果如图 2.2 所示。
图 2.2 HA 重组蛋白 SDS-PAGE 分析质分子质量标准；1: pET28a(+)空载体；2. 20℃上清；3. 20℃沉淀；4. 25℃上清沉淀；6. 30℃上清；7. 30℃沉淀；8. 37℃上清；9. 37℃沉淀；Fig.2.2 Analysis of recombinant HA protein by SDS-PAGE: Protein molecular marker; 1: pET28a(+) vector；2: Expresse supernatant 20 ℃; 3ecipitation 20 ℃; 4: Expresse supernatant 25 ℃; 5: Express precipitation 25 ℃; 6: upernatant 30 ℃; 7: Express precipitation 30 ℃; 8: Expresse supernatant 37 ℃; 9: precipitation 37℃;选重组菌株最佳诱导条件要影响蛋白表达三组因素，利用控制变量实验法对诱导温度、诱导诱导时间做逐次筛查，探索出 HA 重组蛋白的最佳诱导条件为 30mol/L，诱导时间 10h 。）加入适量的 1mmol/LIPTG，将 4 支试管分别放置于 20℃、25℃、
【参考文献】：
期刊论文
[1]H5亚型流感病毒HA头部球状结构域在毕赤酵母中的高效表达及其免疫原性分析[J]. 范文辉,王萌,刘丽蓉,张鹤,张爽,凌红丽,刘文军,李晶. 生物工程学报. 2019(01)
[2]逆转录环介导等温扩增技术检测H7N9禽流感病毒基因[J]. 张锦海,陈文琦,韩一芳,张琪,叶福强,王太武,陈乐如,王长军. 东南国防医药. 2019(01)
[3]禽流感病毒H7亚型竞争ELISA抗体检测方法的建立[J]. 范俊青,魏燕鸣,邹忠,李冉,孙小美,金梅林. 养殖与饲料. 2019(01)
[4]氧化石墨烯的制备及其在生物传感器中的应用进展[J]. 裴新月,樊璨,王诗. 湖北科技学院学报(医学版). 2018(06)
[5]H5N8亚型流感病毒双重实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价[J]. 孙洁,廖立珊,于力,吴绍精,刘建利,陶虹,杨俊兴,曾少灵,林彦星,黄超华,林庆燕,秦智锋. 上海畜牧兽医通讯. 2018(06)
[6]45°倾斜光纤光栅波长可调谐调Q光纤激光器[J]. 胡啸林,闫志君,黄千千,邹传杭,王天行,牟成博. 光电工程. 2018(10)
[7]基于45°倾斜光栅的重复频率可切换被动谐波锁模光纤激光器[J]. 凌远达,黄千千,邹传杭,闫志君,牟成博. 红外与激光工程. 2018(08)
[8]倾斜光纤光栅传感器[J]. 郭团,刘甫,邵理阳. 应用科学学报. 2018(01)
[9]流感病毒M1与NA蛋白的相互作用及其在病毒出芽中的作用[J]. 包旦奇,侯天龙,李泽君,刘芹防,张七斤. 中国动物传染病学报. 2017(05)
[10]一种基于液相基因芯片技术对甲型和乙型流感病毒分型检测方法的建立[J]. 陈锦龙,吕刚,张优,符瑞佳,尹飞飞. 分子诊断与治疗杂志. 2017(05)
博士论文
[1]基于氧化石墨烯的光学生化传感检测研究[D]. 张倩.浙江大学 2017
硕士论文
[1]倾斜光纤光栅的谱特性与折射率传感特性研究[D]. 高久鹏.南京邮电大学 2017
[2]基于81°倾斜光栅的光纤传感器理论和实验的研究[D]. 舒慧.电子科技大学 2016
[3]常见流感病毒分型基因芯片检测方法的建立和应用[D]. 王斗.北京工业大学 2013
本文编号：2965300
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