B型流感病毒NP蛋白双单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立

发布时间：2021-01-09 05:30

　　为建立B型流感病毒（IBV）快速诊断方法,本研究采用真核表达系统表达并纯化了IBV中高度保守的核糖核蛋白（NP）,以其为抗原,免疫小鼠制备IBV NP蛋白单克隆抗体（MAb）,选取抗原表位长、特异性强的MAb2B3-5作为捕获抗体,选取抗原表位短、灵敏度高的MAb 3C3-7经HRP标记后作为检测抗体,经条件优化,建立了检测IBV NP蛋白的双MAb夹心ELISA检测方法。结果显示,该检测方法捕获抗体包被量为每孔100 ng,检测抗体使用量为每孔20 ng,NP蛋白浓度在3.9 ng/mL～62.5 ng/mL时与OD_450nm呈良好的线性关系,相关系数R2>0.99。利用该ELISA方法对多种病毒进行检测,结果显示该方法仅能与IBV发生反应,表明该方法特异性强;灵敏度试验结果显示,该方法对病毒NP蛋白的最低检测限为13.26 ng/mL,敏感性高;批内和批间重复性变异系数均小于8%,重复性好;捕获抗体可在25℃和37℃保存4 d,热稳定性好。利用本实验建立的ELISA方法和qPCR方法对本实验室保存的40份人咽拭子进行检测,该方法与qPCR方法相比符合率为... 

【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(08)北大核心

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【部分图文】：

图22株MAbs抗原表位的westernblot鉴定结果Fig.2WesternblotidentificationofMAbsepitopesin2trains2B3-51:pCAGGS-GST-IBVYmPJ18NPmut1;2:pCAGGS-GST-IBVYmPJ18NPmut2


本文编号：2966060