FPV JL09C2株中REV插入区基因的表达验证及单抗制备

发布时间：2021-01-09 08:36

　　鸡痘是由鸡痘病毒（Fowlpox virus，FPV）引起的一种接触性传染病，广泛发生于鸡和火鸡，临床上主要分为皮肤型、黏膜型和混合型三种。皮肤型鸡痘特征性病变表现为局灶性上皮组织增生；黏膜型又称“白喉型”，以口腔和咽喉黏膜发生纤维素性坏死性炎症为主要特征，由于该型病鸡常发生窒息死亡而导致此病变在临床上不常见；混合型则兼有以上两种类型的病理变化。FPV感染可引起母鸡产蛋量下降、育肥鸡生长迟缓，甚至出现继发感染而导致病鸡死亡，因此该病的发生对世界养禽业造成严重的经济损失。近半个世纪以来，在鸡痘流行区域，主要使用鸡痘和鸽痘病毒疫苗进行免疫预防，虽然因普遍采用疫苗免疫接种使鸡痘疫情报道明显减少，但由于病毒变异而导致免疫失败引发鸡痘的病例时有发生。近年来，在我国的FPV疫苗毒和野毒株中不断有REV的污染和基因整合的报道，REV基因片段甚至完整的基因组整合在FPV基因组中的现象比较普遍。2009年，本实验室从吉林省公主岭市某爆发鸡痘的大型鸡场中分离到了一株高致病性鸡痘病毒，通过鸡胚进行克隆纯化，并将其命名为FPV JL09C2。对FPV JL09C2株进行全基因组测序发现，其基因组中整合了接近全... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

FPV基因组结构

图1.1 PCR扩增FPV ORF 202(1，4)，REV gag(2，5)、gp90(3)、及env(6)的电泳分析;M 为100bp DNA Ladder Marker。 Amplification of FPV ORF 202(1，4)，REV gag(2，5)、gp90(3)and env geneM: 100bp DNA Ladder Marker (bp).V-gag， REV-gp90 蛋白在 E.coli BL21(DE3)中的诱导表达得 REV-gag， REV-gp90 重组原核表达蛋白，分别将构建好的 pET28a-gag 原核表达重组质粒转化表达菌 E.coli BL21(DE3)中，表达重组菌在 37℃0=0.8-1.0 后加入终浓度为 1mM IPTG 诱导表达 5 小时后 SDS-PAGE 检查目的在诱导表达 5h 后与诱导表达前相比在蛋白分子量大小 45 和 50KDa 左右的蛋白条带（图 1.2）。

图1.2 SDS-PAG分析蛋白的表达和纯化情况1：诱导前;2：诱导后。B，D为A，C纯化后的蛋白; M:蛋白预Fig. 1.2 SDS-PAG analysis of gene expression1：pre-expression;2：expression; M:protein marker.REV-gp90 表达情况分析C2 中插入的 REV 序列在 5’ 和 3’ 端 LTR 分别缺失 29 和 320bR 为 REV 的启动子。为了验证两端缺失的序列是否会影响 RECD

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2966323