microRNA在猪多能干细胞成脂分化过程中的作用研究

发布时间：2021-01-10 06:47

　　随着小鼠和人诱导性多能干细胞（iPSCs）细胞系的建立，已有多项研究表明利用这种新兴的体细胞重编程技术在许多物种都获得了成功。iPSCs技术相对容易操作，重复性好，且能够避免由胚胎干细胞（Embryonic stem cells，ES）带来的伦理道德问题，因而具有良好的研究前景和应用价值。作为哺乳动物，猪与人类在器官形态、大小、功能等方面均具有相似的生理指标。对于猪胚胎干细胞（pESCs）的研究已有二十年的历史，然而由于对谱系决定因子及猪早期胚胎发育的调控机制所知甚少，单纯的照搬啮齿类及灵长类动物的ES建立方法，并不完全适用于猪这个品系。因而目前，尚未建立起纯系的猪ES系。而大鼠iPSCs的成功获取，是在未成功建立ES细胞系之前利用iPSCs技术建立多能干细胞系的成功范例，这将干细胞领域的研究带到了一个崭新的时代。本研究选用猪胎儿成纤维细胞作为供体细胞，通过逆转录病毒介导鼠源Oct4，Sox2，Klf4及c-Myc（OSKM）四个调控因子，优化培养条件进行诱导重编程，成功建立猪诱导性多潜能干细胞（piPSCs）系，通过检测所得piPSCs不仅具有多潜能基因的表达，体外形成拟胚体的能力，... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：103 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

microRNAs对ESC的调控机制[80]

逆转录病毒包装Fig1.2PackageofretroviruscontainingGFPin293GP

图 1.3 PFF 重编程为 piPSCs 过程中的形态变化（A:D0，B:D9，C:D14）Fig 1.3 Alteration of the morphology during PFF reprogramming1.3.2 猪 iPSCs 鉴定挑取单克隆在新的饲养层细胞上进行扩大培养进行进一步鉴定。首先，对其进行碱性磷酸酶（AP）染色，结果显示所得克隆均为阳性（图 1.4）。提取piPSCs 总 RNA，通过半定量 PCR 检测内外源多能基因表达情况，结果显示piPSCs 内源性多能基因 Sox2、Oct4、Nanog 和 Lin28 均被激活（图 1.5）。利用SSEA-1、OCT4、SOX2 和 NANOG 几种抗体对克隆进行免疫荧光染色，结果均为阳性（图 1.6）。


本文编号：2968258