猪免疫抑制性受体PD-1及其配体PD-L1胞外区原核表达及其活性的初步分析

发布时间：2021-01-11 13:55

　　PD-1（programmed death1, PD-1）最初是从T细胞中克隆出来的，是CD28家族的一个成员，主要在活化的T细胞、B细胞和单核细胞上表达，有PD-L1和PD-L2两个配体。PD-1及其配体相互作用致使效性T细胞的功能抑制，在阻断PD-1/PD-L1通路后，可使功能耗竭的T细胞功能恢复。有研究表明，PD-1的表达量与疾病的进程有关，且在阻断PD-1/PD-L1通路后可治疗持续性病毒感染。但是，由于缺乏原材料，在猪病中对PD-1/PD-L1通路的研究较少。本研究以猪PD-1及PD-L1为研究对象，通过克隆、原核表达获得正确表达的PD-1及PD-L1胞外区蛋白，为研究PD-1/PD-L1通路在猪病的作用提供原材料。本研究根据GenBank中猪PD-1和PD-L1的基因序列及原核表达载体多克隆酶切位点，设计其胞外区引物，以猪外周血单个核细胞（PBMC）的cDNA为模板，应用PCR技术扩增PD-1、PD-L1胞外区片段，并与pMD18-T-simple载体连接，构建pMD-PD1、pMD-PDL1重组质粒，转化至DH5α中通过菌液PCR筛选阳性克隆并测序，利用限制性内切酶Eco... 

【文章来源】：河南科技学院河南省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CD28家族成员及其配体简图

第一章文献综述PD-1 及其配体 PD-Ls 的晶体结构（图 2）[12-13]。CTLA-4IgV 区的链疏水序列 MYPPY与 B7-1 和 B7-2 结合，而 PD-1 是以前β面（AGFCC’β链）与 PD-L1（AGFCC’）或 PD-L2（AGFC）的β面相互作用并结合。PD-1 与 PD-Ls 的这种面对面的作用，使二者的连接区域比 CTLA-4/B7s 的作用面大，且使所形成的 PD-1/PD-Ls 复合物更加牢固。

最后透析到 PBS 溶液蛋白的浓度。er 公司的紫外分光光度计 D0 nm 测定样品 A260和 A280A260)×稀释倍数，计算出所外区基因片段的克隆D-1、PD-L1 胞外区基因片扩增出大小约为 366 bp 和图 2-2。M 1 2p

【参考文献】：
期刊论文
[1]B7-H1 expression is associated with expansion of regulatory T cells in colorectal carcinoma[J]. Dong Hua,Yong Mao,Department of Oncology,the Fourth Affiliated Hospital of Suzhou University,Wuxi 214062,Jiangsu Province,China Yu-Yu Wu,Department of Pathology,The Fourth Affiliated Hospital of Soochow University,Wuxi 214062,Jiangsu Province,China Jing Sun,Yong Mao,Xue-Guang Zhang,Institute of Medical Biotechnology,Soochow University,Suzhou 215007,Jiangsu Province,China Lu-Jun Chen,Clinical central Laboratory,The Third Affiliated Hospital of Soochow University,Changzhou 213003,Jiangsu Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2012(09)



本文编号：2970890