奶牛乳腺上皮细胞的分离鉴定及DBP诱导β-酪蛋白的分泌研究

发布时间：2021-01-13 15:45

　　乳腺生物反应器充分利用动物乳腺组织具有合成和分泌乳汁的功能,目前被广泛使用于生产功能蛋白等,现已成为极具开发应用前景的生物技术。乳腺上皮细胞是乳腺组织中特异性具有分泌功能的细胞,在体外分离培养的乳腺上皮细胞同样拥有与在体内组织相似的分泌功能,建立乳腺上皮细胞体外培养系统为研究乳腺组织的泌乳机理、验证和检测乳腺特异表达载体功能具有重要意义。本研究对牛乳腺上皮细胞进行分离、培养和鉴定,并用邻苯二甲酸二丁酯（DBP）诱导体外培养的乳腺上皮细胞表达β-酪蛋白。论文的研究内容主要包括两个部分：1.利用泌乳期的奶牛乳腺组织,在体外进行乳腺上皮细胞的分离、纯化和鉴定。本研究利用组织块培养法、酶消化培养法、机械培养法进行分离细胞,利用差速贴壁结合差速脱壁纯化分离的乳腺上皮细胞。对分离细胞的显微观察表明,三种方法培养细胞可以获得成纤维样细胞和上皮样细胞混合生长的细胞,培养细胞形态完整；差速脱壁法和差速贴壁法结合纯化细胞,成纤维样细胞完全消失,所得细胞全部为为鹅卵石状或卵圆形的上皮样细胞。纯化的细胞传代培养,细胞进行显微观察、生长曲线绘制、核型制备,结果表明培养的细胞形态良好、具有正常的上皮细胞形态、细胞... 

【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 奶牛乳腺上皮细胞的分离鉴定
    引言
    1.1 实验材料
        1.1.1 主要仪器和设备等
        1.1.2 主要试剂及耗材
        1.1.3 活体材料的获取
    1.2 实验方法
        1.2.1 乳腺细胞的原代培养
        1.2.2 牛乳腺上皮细胞冷冻和解冻培养
        1.2.3 牛乳腺上皮细胞的纯化
        1.2.4 牛乳腺上皮细胞的形态观察实验
        1.2.5 牛乳腺上皮细胞生长曲线的绘制
        1.2.6 牛乳腺上皮细胞染色体制备及核型分析
        1.2.7 牛乳腺上皮细胞的免疫荧光鉴定
        1.2.8 PCR检测β-酪蛋白在mRNA水平的表达
    1.3 实验结果
        1.3.1 牛乳腺上皮细胞的原代培养
        1.3.2 牛乳腺上皮细胞纯化
        1.3.3 细胞形态观察结果
        1.3.4 牛乳腺上皮细胞的生长曲线
        1.3.5 牛乳腺上皮细胞的染色体制备及核型分析
        1.3.6 牛乳腺上皮细胞的免疫荧光染色
        1.3.7 牛乳腺上皮细胞β-casein表达检测
    1.4 讨论
        1.4.1 牛乳腺上皮细胞的分离培养
        1.4.2 牛乳腺上皮细胞的鉴定
    参考文献
第二章 邻苯二甲酸二丁酯（DBP）对牛乳腺上皮细胞β-casein分泌的影响的研究
    引言
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验所使用的细胞
        2.1.2 实验仪器设备
        2.1.3 实验试剂及耗材
    2.2 实验方法
        2.2.1 牛乳腺上皮细胞的诱导培养
        2.2.2 DPB对牛乳腺上皮细胞的细胞活性影响分析（MTT法分析）
        2.2.3 流式细胞仪测定牛乳腺上皮细胞活力
        2.2.4 诱导培养的牛乳腺上皮细胞总RNA的提取
        2.2.5 RNA反转录实验
        2.2.6 RT-PCR检测β—酪蛋白在mRNA水平的表达
        2.2.7 统计分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 诱导培养的乳腺上皮细胞的形态
        2.3.2 DBP对牛乳腺上皮细胞增殖的影响
        2.3.3 DBP对牛乳腺上皮细胞活力的影响
        2.3.4 DBP对牛乳腺上皮细胞中β-酪蛋白表达量的诱导
    2.4 讨论
    参考文献
文献综述
    1 动物生物反应器结合转基因技术
        1.1 生物反应器的种类及发展
        1.2 转基因技术及其发展
        1.3 乳腺生物反应器
    2 乳腺组织和乳腺生物反应器
        2.1 乳腺组织
        2.2 乳腺生物反应器的制备过程
        2.3 优点
        2.4 不同的转基因生物反应生产的外源蛋白的比较
        2.5 乳腺生物反应器的药物生产国外现状
    3 乳腺上皮细胞
    4 乳腺上皮细胞的诱导
        4.1 乳腺组织的激素调节
        4.2 中草药成分的诱导作用
        4.3 转录水平的调控
        4.4 DBP诱导β-酪蛋白作用
    参考文献
致谢
攻读硕士期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]转基因动物生物反应器研究及产业化进程[J]. 商圣哲,赵杰,李宁.  生物产业技术. 2014(01)
[2]转基因动物生物反应器研究进展[J]. 李紫聪,黄晓灵,刘德武,吴珍芳.  广东畜牧兽医科技. 2013(04)
[3]CRISPR/Cas9介导的基因组定点编辑技术[J]. 方锐,畅飞,孙照霖,李宁,孟庆勇.  生物化学与生物物理进展. 2013(08)
[4]催乳素、雌激素和胰岛素对奶牛乳腺细胞酪蛋白表达的影响[J]. 李冬辉.  牡丹江大学学报. 2013(07)
[5]不同浓度胰岛素样生长因子-Ⅰ对体外培养奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白和脂肪合成相关基因表达的影响[J]. 王皓宇,秦彤,郝海生,杜卫华,赵学明,朱化彬.  中国畜牧兽医. 2013(07)
[6]哺乳动物乳腺上皮细胞的研究和应用[J]. 闫亚彬,黄英.  实验动物与比较医学. 2013 (03)
[7]piggyBac转座子在牛基因组的整合位点及特征分析[J]. 杜新华,高雪,张路培,高会江,李俊雅,许尚忠.  遗传. 2013(06)
[8]胰岛素、催乳素和氢化可的松对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响[J]. 田青,王洪荣.  中国饲料. 2013(02)
[9]奶牛αs-酪蛋白多克隆抗体的制备、纯化及鉴定[J]. 庞学燕,季昀,王洪荣,魏宗友,王梦芝.  动物营养学报. 2012(11)
[10]动物乳腺生物反应器的研究内容及研究现状[J]. 肖耀明,朱兰,殷方芝,卞益,陶军,石秀颖.  上海畜牧兽医通讯. 2012(04)

硕士论文
[1]王不留行对奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号转导通路的影响[D]. 孟海洋.东北农业大学 2013



本文编号：2975131