猪瘟病毒荧光抗体的制备及初步应用
发布时间：2021-01-14 20:54
猪瘟（classical swine fever, CSF）是由猪瘟病毒（classical swine fever virus, CSFV）引起猪的一类具有高度危害性的传染病,具有高度接触性、传播快速的临床特点。在当前的养殖过程中,由于疫苗的不恰当使用和病毒自身变异等因素,猪瘟的流行发生了改变,在猪群中该病从大规模的流行转变为地方性散发,在个体猪只中该病多以非典型性、慢性及隐性形式出现,这种非典型性、慢性及隐性带毒常常会出现在母猪群中,造成妊娠母猪流产,产死胎、木乃伊胎等繁殖障碍,同时也会造成母猪的垂直传播及猪群中水平传播,从而给养猪业带来极大的危害。本研究通过制备抗猪瘟病毒单克隆荧光抗体,旨在为猪瘟病毒的检测提供一种快速而又敏感的检测试剂。具体研究内容如下：1.猪瘟病毒单克隆荧光抗体的制备复苏和扩大培养由本实验室研制的猪瘟主要保护性抗原E2囊膜蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞AH9株,通过Babl/c小鼠腹腔注射杂交瘤细胞,大量制备了猪瘟单克隆抗体,运用辛酸-硫酸铵法与Sephadex G-25快速蛋白纯化系统进行纯化,得到浓度较高的猪瘟单克隆抗体（蛋白浓度为11.491mg/mL）。经S...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1. 文献综述
1.1 猪瘟概述
1.2 猪瘟病毒研究进展
1.2.1 猪瘟病毒粒子的结构
1.2.2 猪瘟病毒的生物学特性
1.2.3 猪瘟病毒基因组结构
1.2.5 猪瘟病毒所编码蛋白及其功能
1.3 猪瘟病毒的致病机制
1.4 猪瘟全球流行现状
1.5 猪瘟病毒诊断方法研究进展
1.5.1 猪瘟临床诊断
1.5.2 猪瘟抗体检测方法
1.5.3 猪瘟病毒检测方法
2. 目的与意义
3 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 质控毒株及阴性参考模板
3.1.2 待检样品
3.1.3 主要仪器
3.1.4 主要试剂及酶
3.1.5 细胞株和实验动物
3.2 实验方法
3.2.1 猪瘟病毒AH9株杂交瘤细胞的复苏和培养
3.2.2 猪瘟病毒单克隆抗体的制备及纯化
3.2.3 猪瘟病毒单克隆荧光抗体的制备与纯化
3.2.4 猪瘟病毒单克隆荧光抗体实验条件的优化
3.2.5 猪瘟直接免疫荧光检测方法的初步应用
4 结果与分析
4.1 猪瘟病毒AH9株杂交瘤细胞的复苏与鉴定
4.2 猪瘟病毒单克隆抗体的制备及纯化
4.2.1 猪瘟病毒单克隆抗体纯度的测定
4.2.2 猪瘟病毒单克隆抗体浓度的测定
4.2.3 猪瘟病毒单克隆抗体效价的测定
4.3 猪瘟病毒单克隆抗体荧光素的标记及纯化
4.4 猪瘟病毒单克隆荧光抗体实验条件的优化及2种检测方法的符合对比性实验
4.4.1 猪瘟病毒单克隆荧光抗体实验条件的优化
4.4.2 猪瘟单克隆荧光抗体与RT-Nested PCR样品检测符合对比性实验结果
4.5 猪瘟直接免疫荧光抗体的临床应用
4.5.1 组织样品检测
4.5.2 送检样品检测
5 讨论
6 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪瘟抗体间接ELISA检测方法的建立和优化[J]. 徐璐,范学政,徐和敏,赵启祖,邹兴启,朱元源,王琴,宁宜宝,王芳. 中国兽医杂志. 2012(03)
[2]2009—2010年部分猪场猪主要传染病流行病学调查[J]. 廖启顺,李志祥,丁联成,柴俊,徐佳,孙绍美,肖晶,刘旭川,张以芳. 中国畜牧兽医. 2012(02)
[3]单克隆抗体间接免疫荧光检测猪瘟病毒方法的建立[J]. 许保疆,游一,郭成留,王川庆. 中国兽医学报. 2010(12)
[4]猪圆环病毒2型感染对猪瘟疫苗体液免疫应答的影响[J]. 司兴奎,郭鑫,杨汉春. 中国兽医学报. 2009(07)
[5]温和型猪瘟流行特点及防制策略[J]. 吴庆华,张才林,杨光. 湖北畜牧兽医. 2008(10)
[6]表达猪瘟病毒石门株E0基因重组鸡痘病毒的构建及动物免疫试验[J]. 王养会,李谱华,张淼涛,张彦明. 病毒学报. 2008(01)
[7]猪瘟病毒及其致病机制研究进展[J]. 田宏,刘湘涛,张彦明,林彤,吴锦艳,谢庆阁. 动物医学进展. 2007(S1)
[8]猪瘟病毒4种检测方法的比较[J]. 张朝红,张彦明,张永国,郭抗抗,魏中锋,孙裴. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2007(05)
[9]猪瘟病毒实验室诊断研究进展[J]. 胡晓苗,张丹俊,汪丽,孙慧. 畜禽业. 2007(03)
[10]猪瘟病毒检测用寡核苷酸芯片探针的筛选[J]. 杨林,李守军,张桂红,罗玉钧,廖明,王升启. 中国兽医杂志. 2007(01)
硕士论文
[1]猪瘟病毒强毒株与疫苗C株鉴别方法的建立及疫苗病毒定量检测的研究[D]. 李安.山东农业大学 2010
[2]猪瘟病毒结构蛋白与生物学特性的关系[D]. 朱元源.中国兽医药品监察所 2010
[3]猪瘟病毒套式RT-PCR检测方法的建立和种猪场猪瘟免疫与净化研究[D]. 罗勇.华中农业大学 2009
本文编号：2977529
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1. 文献综述
1.1 猪瘟概述
1.2 猪瘟病毒研究进展
1.2.1 猪瘟病毒粒子的结构
1.2.2 猪瘟病毒的生物学特性
1.2.3 猪瘟病毒基因组结构
1.2.5 猪瘟病毒所编码蛋白及其功能
1.3 猪瘟病毒的致病机制
1.4 猪瘟全球流行现状
1.5 猪瘟病毒诊断方法研究进展
1.5.1 猪瘟临床诊断
1.5.2 猪瘟抗体检测方法
1.5.3 猪瘟病毒检测方法
2. 目的与意义
3 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 质控毒株及阴性参考模板
3.1.2 待检样品
3.1.3 主要仪器
3.1.4 主要试剂及酶
3.1.5 细胞株和实验动物
3.2 实验方法
3.2.1 猪瘟病毒AH9株杂交瘤细胞的复苏和培养
3.2.2 猪瘟病毒单克隆抗体的制备及纯化
3.2.3 猪瘟病毒单克隆荧光抗体的制备与纯化
3.2.4 猪瘟病毒单克隆荧光抗体实验条件的优化
3.2.5 猪瘟直接免疫荧光检测方法的初步应用
4 结果与分析
4.1 猪瘟病毒AH9株杂交瘤细胞的复苏与鉴定
4.2 猪瘟病毒单克隆抗体的制备及纯化
4.2.1 猪瘟病毒单克隆抗体纯度的测定
4.2.2 猪瘟病毒单克隆抗体浓度的测定
4.2.3 猪瘟病毒单克隆抗体效价的测定
4.3 猪瘟病毒单克隆抗体荧光素的标记及纯化
4.4 猪瘟病毒单克隆荧光抗体实验条件的优化及2种检测方法的符合对比性实验
4.4.1 猪瘟病毒单克隆荧光抗体实验条件的优化
4.4.2 猪瘟单克隆荧光抗体与RT-Nested PCR样品检测符合对比性实验结果
4.5 猪瘟直接免疫荧光抗体的临床应用
4.5.1 组织样品检测
4.5.2 送检样品检测
5 讨论
6 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪瘟抗体间接ELISA检测方法的建立和优化[J]. 徐璐,范学政,徐和敏,赵启祖,邹兴启,朱元源,王琴,宁宜宝,王芳. 中国兽医杂志. 2012(03)
[2]2009—2010年部分猪场猪主要传染病流行病学调查[J]. 廖启顺,李志祥,丁联成,柴俊,徐佳,孙绍美,肖晶,刘旭川,张以芳. 中国畜牧兽医. 2012(02)
[3]单克隆抗体间接免疫荧光检测猪瘟病毒方法的建立[J]. 许保疆,游一,郭成留,王川庆. 中国兽医学报. 2010(12)
[4]猪圆环病毒2型感染对猪瘟疫苗体液免疫应答的影响[J]. 司兴奎,郭鑫,杨汉春. 中国兽医学报. 2009(07)
[5]温和型猪瘟流行特点及防制策略[J]. 吴庆华,张才林,杨光. 湖北畜牧兽医. 2008(10)
[6]表达猪瘟病毒石门株E0基因重组鸡痘病毒的构建及动物免疫试验[J]. 王养会,李谱华,张淼涛,张彦明. 病毒学报. 2008(01)
[7]猪瘟病毒及其致病机制研究进展[J]. 田宏,刘湘涛,张彦明,林彤,吴锦艳,谢庆阁. 动物医学进展. 2007(S1)
[8]猪瘟病毒4种检测方法的比较[J]. 张朝红,张彦明,张永国,郭抗抗,魏中锋,孙裴. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2007(05)
[9]猪瘟病毒实验室诊断研究进展[J]. 胡晓苗,张丹俊,汪丽,孙慧. 畜禽业. 2007(03)
[10]猪瘟病毒检测用寡核苷酸芯片探针的筛选[J]. 杨林,李守军,张桂红,罗玉钧,廖明,王升启. 中国兽医杂志. 2007(01)
硕士论文
[1]猪瘟病毒强毒株与疫苗C株鉴别方法的建立及疫苗病毒定量检测的研究[D]. 李安.山东农业大学 2010
[2]猪瘟病毒结构蛋白与生物学特性的关系[D]. 朱元源.中国兽医药品监察所 2010
[3]猪瘟病毒套式RT-PCR检测方法的建立和种猪场猪瘟免疫与净化研究[D]. 罗勇.华中农业大学 2009
本文编号：2977529
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