利用白藜芦优化牛胚胎体外培养液的研究

发布时间：2021-01-15 09:40

　　体细胞克隆技术在理论和实践上都具有巨大的价值，但目前克隆效率普遍低下，这已成为制约克隆技术在生产上广泛应用的主要原因。为提高体细胞克隆的效率，研究人员对克隆技术的各个环节进行了优化。其中，培养液的优化是研究的热点之一。白藜芦醇作为抗氧化剂，能够帮助调节胚胎细胞发育状态和凋亡；表皮生长因子（EGF）、胰岛素样生长因子（IGF）已经被证实能够对牛胚胎发育起促进作用；转铁蛋白和矿物元素同样也是胚胎发育所必须的；同时，许多促进重编程的因子也被添加到胚胎体外培养体系中来。本实验在传统培养液的基础上，针对胚胎培养体系高氧化压力导致的胚胎发育损伤问题，以孤雌生殖和体外受精胚胎为模型，利用EGF、ITS作为血清替代物，添加白藜芦醇研制新型限定培养液，同时也为下一步将其应用于体细胞克隆胚胎奠定基础。本实验的主要研究内容和结果如下：1.以孤雌生殖胚胎和体外受精胚胎为模型，探究白藜芦醇对牛胚胎体外发育能力的作用。筛选出了0.5μM为促进胚胎发育的最适浓度，发现其能够加速胚胎卵裂，促进囊胚形成；能够增加牛胚胎体外发育囊胚细胞数、增加内细胞团比例；能够上调凋亡抑制基因Bcl-2和下调凋亡促进基因Bax，降低囊胚... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 体细胞核移植
    1.2 影响体细胞核移植效率的因素
    1.3 体细胞核移植的重编程
    1.4 胚胎体外培养体系
        1.4.1 胚胎培养液
        1.4.2 无血清培养液
    1.5 白藜芦醇
第二章 白藜芦醇对牛胚胎体外发育的影响
    2.1 材料和方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 仪器设备
        2.1.3 试剂耗材与配方
        2.1.4 卵母细胞的采集及体外成熟培养
        2.1.5 孤雌激活
        2.1.6 体外受精
        2.1.7 囊胚差异染色及细胞计数
        2.1.8 囊胚凋亡染色
        2.1.9 胚胎发育各时期 ROS 水平检测
        2.1.10 免疫荧光强度分析
        2.1.11 胚胎 cDNA 的提取获得
        2.1.12 RT-PCR 检测
        2.1.13 试验数据的统计分析
    2.2 实验结果
        2.2.1 白藜芦醇对牛孤雌激活胚胎体外发育率的影响
        2.2.2 白藜芦醇对牛体外发育囊胚总细胞数的影响
        2.2.3 白藜芦醇对牛体外发育 PA 和 IVF 囊胚凋亡的影响
        2.2.4 白藜芦醇对牛体外发育 PA 和 IVF 胚胎细胞内 ROS 的影响
    2.3 讨论
    2.4 小结
第三章 限定培养液培养效果的研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 仪器设备
        3.1.3 试剂耗材与配方
        3.1.4 卵母细胞的采集及体外成熟培养
        3.1.5 孤雌激活
        3.1.6 囊胚差异染色及细胞计数
        3.1.7 囊胚凋亡染色
        3.1.8 试验数据的统计分析
    3.2 实验结果
        3.2.1 不同培养液对牛孤雌激活胚胎体外发育率的影响
        3.2.2 不同培养液对牛体外发育囊胚总细胞数的影响
        3.2.3 不同培养液对牛体外发育囊胚凋亡的影响
    3.3 讨论
    3.4 小结
全文结论
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]生长因子EGF、bFGF对猪孤雌胚体外发育的影响[J]. 刘吉,潘登科,张莉,牟玉莲,张勇,杨述林,王子荣,冯书堂.  畜牧兽医学报. 2007(01)

博士论文
[1]细胞内ROS水平改变对细胞活性及相关信号传导途径的影响[D]. 秦勇.浙江大学 2012

硕士论文
[1]不同培养基对牛转基因克隆胚发育及印迹基因Igf2甲基化状况的影响[D]. 苏建民.西北农林科技大学 2009
[2]BCB染色法筛选牛卵母细胞的初探[D]. 曹泽磊.西北农林科技大学 2009
[3]牛体外受精技术体系的优化研究[D]. 胡林勇.西北农林科技大学 2008



本文编号：2978680