转猪Kiss1基因和FSHR基因小鼠制备及繁殖性能评估

发布时间：2021-01-15 17:57

　　亲吻素（Kissl）和卵泡刺激素受体（Follicle Stimulating Hormone Receptor, FSHR）基因对产仔数有显著影响,在家畜繁殖生理学领域占有重要地位。Kissl是公认的下丘脑促性腺激素释放激素（Gonadotropin Releasing Hormone, GnRH）上游重要调控因子,在性腺轴系统中起中枢节点的作用,能直接作用于GnRH神经元,刺激GnRH的分泌,激活性腺轴,并且在发情周期内正向调控黄体生成素（Luteinizing Hormone, LH）和卵泡刺激素（Follicle Stimulating Hormone, FSH）的分泌。在雌性哺乳动物中,卵泡刺激素的主要作用是促进性腺发育和维持正常的生殖功能,促进卵巢中卵泡的生长、卵泡颗粒细胞的增生和雌激素的合成与分泌,刺激卵泡细胞上LH受体的产生。它对卵泡生长发育和成熟分化起重要调控作用,直接影响卵泡发育的数量和质量,而FSHR是FSH发挥生理功能不可或缺的重要因素。本文旨在探究Kissl和FSHR基因与繁殖功能之间的关系,以猪的Kissl和FSHR基因为研究对象,将构建的小鼠脑部特异表达的... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文縮略表
目录
第一章 文献综述
    1 引言
        1.1 Kiss1/GPR54基因的定义
        1.2 Kiss1/GPR54系统的分布
        1.3 Kiss1/GPR54系统与繁殖系统的关系
            1.3.1 Kiss1/GPR54系统与生殖系统发育
            1.3.2 Kisspeptin/GPR54在下丘脑的表达
            1.3.3 Kiss1和Kisspeptin在其他部位的表达
        1.4 FSHR的研究概况
            1.4.1 FSHR的定义与结构
            1.4.2 FSHR的生理功能
        1.5 pCaMKⅡ启动子的研究进展
        1.6 转基因动物研究进展
            1.6.1 转基因动物研究概况
            1.6.2 转基因动物制备方法
                1.6.2.1 原核显微注射技术
                1.6.2.2 慢病毒载体法
                1.6.2.3 体细胞核移植法
                1.6.2.4 RNAi介导的基因沉默
            1.6.3 转基因动物研究展望
        1.7 课题来源与研究背景
第二章 猪Kiss1基因克隆及真核表达载体pCaMKⅡ-Kiss1和AMH-pFSHR的构建
    1 材料与方法
        1.1 材料与试剂
            1.1.1 菌种与质粒来源
            1.1.2 引物、工具酶及其他试剂
            1.1.3 其他相关试剂配制
        1.2 实验方法
            1.2.1 猪Kiss1基因的克隆及鉴定
                1.2.1.1 猪下丘脑总RNA提取
                1.2.1.2 猪Kiss1基因的扩增
                1.2.1.3 质粒DNA的转化
                1.2.1.4 菌液PCR扩增目的基因
                1.2.1.5 质粒DNA提取
                1.2.1.6 酶切鉴定
            1.2.2 pCaMK Ⅱ-Kiss1真核载体构建
                1.2.2.1 pCaMKⅡ载体的鉴定
                1.2.2.2 pCaMKⅡ载体和pMD19-T-Kiss1载体酶切鉴定
                1.2.2.3 重组载体pCaMKⅡ-Kiss1的构建
                1.2.2.4 质粒DNA提取
            1.2.3 AMH-pFSHR真核表达载体的双酶切鉴定
            1.2.4 重组质粒的线性化
    2 结果与分析
        2.1 猪Kiss1基因的克隆
        2.2 pCaMK Ⅱ-Kiss1真核载体构建
        2.3 AMH-pFSHR真核表达载体的构建
    3 讨论
第三章 原核显微注射法制备转基因小鼠及其鉴定
    1 转基因小鼠的制备的材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 雌鼠发情周期的判断
            1.1.3 小鼠的超排
            1.1.4 受精卵获取
            1.1.5 受精卵的移植
        1.2 转基因小鼠制备
            1.2.1 转基因小鼠制备流程图
    2 转基因小鼠的鉴定
        2.1 材料与方法
            2.1.1 实验材料
                2.1.1.1 引物和探针
                2.1.1.2 相关试剂的配制
            2.1.2 实验方法
                2.1.2.1 鼠尾组织DNA提取
                2.1.2.2 Southern blot检测
                2.1.2.3 Gonome Walking
    3 结果与分析
        3.1 转基因小鼠的PCR检测与Southern blot验证
        3.2 转基因小鼠Genome Walking验证
        3.3 转基因小鼠子代产仔数统计
    4 讨论
全文结论
参考文献
附录1 显微注射猪Kiss1基因的DNA序列（8456bp）
附录2 显微注射猪FSHR基因的DNA序列（5844bp）
致谢
攻读硕士期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]CaMKⅡα基因启动子的克隆和神经细胞特异性Cre表达载体的构建[J]. 徐瑛,周常文,林炤华,柯琦.  中国优生与遗传杂志. 2008(03)
[2]小鼠发情周期观察与最佳超排时期的确定[J]. 傅文栋,孙玉成,索伦,高建明.  北京农学院学报. 2005(02)



本文编号：2979260