Hc-fau基因的获得及其在捻转血矛线虫滞育过程中的调节作用

发布时间：2021-01-16 01:47

　　捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）是寄生于牛、羊等反刍动物真胃内消化道寄生虫,以血液为食,给畜牧业造成极大的经济损失。“滞育”是虫体抵抗外界环境压力的有效措施,也是捻转血矛线虫病呈“春季高潮”的主要原因。因此对滞育现象的研究对于该病的防控具有重要的指导意义。本研究根据Gibbz（1971）的方法获得H. contortus ZJ株滞育虫体；采用RACE、Genome walking技术获得了滞育相关基因Hc-fau完成cDNA和全基因序列；在模式生物秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）中通过显微注射、RNA干扰技术研究该基因在虫体内的对发育的调节作用；通过脂质体转染在HEK293细胞系中研究该基因各功能域之间的关系及功能；运用SwissModel对Hc-FAU进行同源建模。研究成果将为进一步阐述H. contortus滞育机制奠定基础。1.捻转血矛线虫ZJ株滞育虫体的获得及其形态特征本实验参照Adams（1986）的方法,通过瘤胃灌注,将捻转血矛线虫感染性三期幼虫攻入绵羊体内,对绵羊进行处理后,获得捻转血矛线虫滞育虫体。滞育虫体发育程度一致... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：132 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 文献综述
    第一章 捻转血矛线虫及其危害
        1 捻转血矛线虫概述
        2 捻转血矛线虫病
        3 小结
    第二章 秀丽隐杆线虫
        1 秀丽隐杆线虫概述
        2 秀丽隐杆线虫作为模式生物的优势
        3 秀丽隐杆线中的研究现状
        4 秀丽隐杆线虫作为模式生物在寄生性线虫研究的应用
            4.1 利用RNAi进行基因功能性分析
            4.2 利用秀丽隐杆线虫进行寄生虫基因功能的研究
            4.3 利用秀丽隐杆线虫作为表达系统
        5 小结
    第三章 滞育现象
        1 寄生性线虫滞育现象
        2 捻转血矛线虫滞育现象
        3 秀丽隐杆线虫滞育机制研究
            3.1 感受性神经元
            3.2 G蛋白配对受体（GPCRs）和G蛋白信号
            3.3 cGMP信号
            3.4 TGF-β信号
            3.5 IIS
        4 小结
第二部分 研究内容
    第四章 捻转血矛线虫ZJ株滞育虫体的获得及其形态特征
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 H. contortus虫株及感染性三期幼虫（iL3）实验室培养
            1.2 实验动物
            1.3 攻虫
            1.4 H. contortus滞育虫体的采集
            1.5 H.contortus虫体脱鞘
            1.6 温度检测
            1.7 全虫DAPI染色
            1.8 虫体观察
        2 结果
            2.1 感染性三期幼虫鉴定
            2.2 滞育虫体的特征鉴定
            2.3 温度变化
        3 讨论
    第五章 Hc-fau基因的获得及其时空特异性研究
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 材料
            1.2 实验方法
        2 结果
            2.1 RACE结果
            2.2 Genome walking结果
            2.3 已加工假基因的获得
            2.4 Hc-fau启动子区转录活性分析
            2.5 Hc-fau基因时空特异性分析
        3 讨论
    第六章 Hc-FAU在秀丽隐杆线虫发育过程中的调节作用
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 过表达载体的构建
            2.2 基因过表达虫体表型检测
            2.3 Ce-rps30基因沉默虫体表型检测
        3 讨论
    第七章 Hc-FAU天然融合蛋白现象的初步研究
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 真核细胞转染质粒的构建
            2.2 Hc-faua、Hc-faub、Hc-faua-ubil、Hc-faub-ubil、Hc-fau-s30在HEK293细胞中的表达情况
            2.3 Hc-FAU同源建模
        3 讨论
结论
创新点
展望
附录Ⅰ 溶液配制
附录Ⅱ 实验过程中涉及的主要引物序列
参考文献
攻读博士学位期间的主要成果
致谢


【参考文献】：
博士论文
[1]捻转血矛线虫滞育相关基因daf-22和hsp70全基因的获得及其功能的研究[D]. 张红丽.浙江大学 2012
[2]利用秀丽隐杆线虫表达捻转血矛线虫H11蛋白的转基因研究[D]. 周前进.浙江大学 2010



本文编号：2979915