金黄色葡萄球菌、大肠杆菌对BMEC主要炎性因子表达和细胞凋亡的影响
发布时间：2021-01-16 11:03
奶牛乳腺炎作为影响奶牛业发展的主要疾病之一,不仅损害了奶牛的健康,而且导致了乳制品质量的降低,其中病原微生物是诱导乳腺炎产生的首要因素,许多病原微生物能够诱导细胞凋亡,并以此影响疾病的发生及发展过程。为了研究金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）感染奶牛乳腺上皮细胞（Bovine Mammary Epithelial Cells,BMECs）对主要炎性因子表达和细胞凋亡的影响,本实验通过改进联合酶消化组织块法成功体外培养了BMECs并进行免疫细胞化学鉴定。选取纯化后第5代BMECs,分别加入不同浓度的S.aureus、E.coli,经公式计算感染量为0.6 mL得出最佳感染浓度。再分别加入活菌比（MOI）为100:1最佳浓度的S.aureus、E.coli对细胞进行感染,在感染后第0、3、6、9、12小时取样。通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）检测对IL-1β、IL1RⅠ及TNF-α的表达,利用Tunel（terminal d...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
奶牛的原代乳腺上皮细胞光镜观察
图 2 奶牛乳腺上皮细胞的免疫细胞化学鉴定结果Figure2 Immunocyetochmical characteristics of cow mammary epithelial cellsA：角蛋白 18 染色阳性；B：β-酪蛋白染色阳性；C：波形蛋白染色阴性；D：阴性对照A:Positive staining for cytokeratin 18. B:Positive staining for β-casein.
2 结果与分析2.1 引物特异性的确定利用凝胶电泳对PCR产物进行检测，图3、4为以β-actin为内参，引物IL-1β、IL1RⅠ、TNF-α 基因的扩增产物，并未产生二聚体，可用于后续实验。
【参考文献】：
期刊论文
[1]牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8基因的克隆及其在乳腺上皮细胞中的表达[J]. 李月琴,潘阳阳,田奎丽,赵天,张译夫,樊江峰,崔燕,余四九. 农业生物技术学报. 2017(01)
[2]IGF-I和EGF对牦牛乳腺上皮细胞SND1表达的影响[J]. 田奎丽,潘阳阳,李月琴,崔燕,余四九. 中国兽医科学. 2016(11)
[3]脂多糖对奶牛乳腺上皮细胞IL-6、IL-8和TNF-α mRNA表达的影响[J]. 李艳,吕晓峰,徐凯,丁立彤,赵国琦. 上海畜牧兽医通讯. 2016(05)
[4]外源性IL-6与TNF-α对乳腺炎奶牛乳汁中性粒细胞凋亡的影响[J]. 赵弥,张迪,丁玉林,吴建美,毕艳楠,王金玲,王一,于亚娟,王凤龙. 黑龙江畜牧兽医. 2016(17)
[5]一株奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌噬菌体的分离鉴定及其生物学特性的研究[J]. 范锦戴,申晓晨,马若瑶,冯嘉琪,麦凯杰,曾志良,马静云. 中国兽医科学. 2015(12)
[6]FSH促进牦牛输卵管上皮细胞分泌输卵管特异性糖蛋白的研究[J]. 杨融,潘阳阳,崔燕,樊江峰,何俊峰,余四九. 兽类学报. 2015(02)
[7]初产牛乳腺炎的研究进展[J]. 熊雁青,曾超锋. 现代畜牧科技. 2015(01)
[8]奶牛乳腺细菌感染防御机制研究进展[J]. 王敬,雍康,吴有华,杨庆稳. 湖北农业科学. 2014(09)
[9]荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞的分离培养[J]. 厉世伟,谷静娟,赵璐,李龙,王雪涛,况玲. 中兽医医药杂志. 2013(01)
[10]不同浓度脂多糖刺激奶牛乳腺上皮细胞对NF-κB及LAP表达的影响[J]. 程兰玲,曹贵方,温世勇,赵鹏伟,凃勇,菅瑞珍,李琦. 中国兽医科学. 2012(10)
硕士论文
[1]大肠杆菌对奶牛乳腺成纤维细胞TGF-β1、bFGF和PDGF表达的影响[D]. 王一.内蒙古农业大学 2015
[2]TGFβ1对奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞增殖的影响及其信号机制的初步研究[D]. 李莹莹.吉林大学 2014
[3]奶牛乳腺炎大肠杆菌优势血清型相关毒力基因与耐药基因的检测与序列分析[D]. 马超.宁夏大学 2014
[4]奶牛乳腺炎主要病原菌的调查[D]. 何挺.浙江大学 2010
[5]奶牛乳腺炎乳汁三种细胞因子检测及TNF-α对乳腺细胞凋亡和增殖的影响[D]. 杨磊.内蒙古农业大学 2010
[6]奶山羊乳房炎的淋巴细胞与乳腺上皮细胞凋亡规律[D]. 杨庆丽.东北农业大学 2007
本文编号：2980712
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
奶牛的原代乳腺上皮细胞光镜观察
图 2 奶牛乳腺上皮细胞的免疫细胞化学鉴定结果Figure2 Immunocyetochmical characteristics of cow mammary epithelial cellsA：角蛋白 18 染色阳性；B：β-酪蛋白染色阳性；C：波形蛋白染色阴性；D：阴性对照A:Positive staining for cytokeratin 18. B:Positive staining for β-casein.
2 结果与分析2.1 引物特异性的确定利用凝胶电泳对PCR产物进行检测，图3、4为以β-actin为内参，引物IL-1β、IL1RⅠ、TNF-α 基因的扩增产物，并未产生二聚体，可用于后续实验。
【参考文献】：
期刊论文
[1]牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8基因的克隆及其在乳腺上皮细胞中的表达[J]. 李月琴,潘阳阳,田奎丽,赵天,张译夫,樊江峰,崔燕,余四九. 农业生物技术学报. 2017(01)
[2]IGF-I和EGF对牦牛乳腺上皮细胞SND1表达的影响[J]. 田奎丽,潘阳阳,李月琴,崔燕,余四九. 中国兽医科学. 2016(11)
[3]脂多糖对奶牛乳腺上皮细胞IL-6、IL-8和TNF-α mRNA表达的影响[J]. 李艳,吕晓峰,徐凯,丁立彤,赵国琦. 上海畜牧兽医通讯. 2016(05)
[4]外源性IL-6与TNF-α对乳腺炎奶牛乳汁中性粒细胞凋亡的影响[J]. 赵弥,张迪,丁玉林,吴建美,毕艳楠,王金玲,王一,于亚娟,王凤龙. 黑龙江畜牧兽医. 2016(17)
[5]一株奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌噬菌体的分离鉴定及其生物学特性的研究[J]. 范锦戴,申晓晨,马若瑶,冯嘉琪,麦凯杰,曾志良,马静云. 中国兽医科学. 2015(12)
[6]FSH促进牦牛输卵管上皮细胞分泌输卵管特异性糖蛋白的研究[J]. 杨融,潘阳阳,崔燕,樊江峰,何俊峰,余四九. 兽类学报. 2015(02)
[7]初产牛乳腺炎的研究进展[J]. 熊雁青,曾超锋. 现代畜牧科技. 2015(01)
[8]奶牛乳腺细菌感染防御机制研究进展[J]. 王敬,雍康,吴有华,杨庆稳. 湖北农业科学. 2014(09)
[9]荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞的分离培养[J]. 厉世伟,谷静娟,赵璐,李龙,王雪涛,况玲. 中兽医医药杂志. 2013(01)
[10]不同浓度脂多糖刺激奶牛乳腺上皮细胞对NF-κB及LAP表达的影响[J]. 程兰玲,曹贵方,温世勇,赵鹏伟,凃勇,菅瑞珍,李琦. 中国兽医科学. 2012(10)
硕士论文
[1]大肠杆菌对奶牛乳腺成纤维细胞TGF-β1、bFGF和PDGF表达的影响[D]. 王一.内蒙古农业大学 2015
[2]TGFβ1对奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞增殖的影响及其信号机制的初步研究[D]. 李莹莹.吉林大学 2014
[3]奶牛乳腺炎大肠杆菌优势血清型相关毒力基因与耐药基因的检测与序列分析[D]. 马超.宁夏大学 2014
[4]奶牛乳腺炎主要病原菌的调查[D]. 何挺.浙江大学 2010
[5]奶牛乳腺炎乳汁三种细胞因子检测及TNF-α对乳腺细胞凋亡和增殖的影响[D]. 杨磊.内蒙古农业大学 2010
[6]奶山羊乳房炎的淋巴细胞与乳腺上皮细胞凋亡规律[D]. 杨庆丽.东北农业大学 2007
本文编号：2980712
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