中药高效成分对猪肺泡巨噬细胞（3D4/2）功能的影响及其抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）机制的研究

发布时间：2021-01-16 12:22

　　目的：猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiration syndrome,PRRS）,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种具有较强传染性的常见猪病,病毒的一个典型特点就是极易变异,一旦爆发,就会给养猪业造成巨大的经济损失。目前针对该病主要是采取注射疫苗的方式进行预防,但是,尚没有针对患病个体的有效治疗方法。本试验选择3种天然化合物绿原酸、连翘酯苷A和表告依春,分别提取于具有抗病毒作用的常见中草药金银花、连翘和板蓝根。以3D4/2细胞为体外模型,研究三种中药高效成分是否具有增强猪肺巨噬细胞非特异性免疫的作用,是否能够抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒对细胞的感染作用,是否能够抑制由PRRS病毒引起的细胞凋亡,并初步探讨这些中药主要成分的抗病毒机制。方法：（1）采用免疫细胞化学的方法对所使用的3D4/2细胞进行鉴定。（2）运用细胞病变法（Cytopathic effect, CPE）以及噻唑蓝比色法（3-（4,5-dimethyithiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT）来确定中药化合物在3D4... 

【文章来源】：山西农业大学山西省

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１正常３Ｄ４／２细胞及苏木精染色后结果（Ｘ１００）??

图２?３Ｄ４／２细胞鉴定结果（ｘ２００）??Ｆｉｇ．２?３Ｄ４／２?ｃｅｌｌｓ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?（＾２００）??（Ａ）用表皮生长因子样激素受体１抗体作为一抗，正常３Ｄ４／２细胞出现阳性反应（Ｂ）用??ＰＢＳ代替表皮生长因子样激素受体１抗体，作为对照姐，未出现阳性反应。??）?Ｗｉ化化ｅ?Ｆ４／８０?ａｎｔ化ｏｄｉｅｓ?ａｓ?化ｅ?ｆｉｒｓｔ?ａｎｔ化ｏｄｙ，ｎｏｒｍａｌ?３Ｄ４／２?ｃｅｌｌｓ?ｓｈｏｗｅｄ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ．（Ｂ）?Ｉｎｓ化ａｄ?ｏｆ??Ｆ４／８０?ａｎｔ化ｏｄｙ?ｗｉ化?Ｐ目Ｓ?ａｓ?ａ?ｃｏｎ化ｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｄｉｄ?ｎｏｔ?ａｐｐｅａｒ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ．??图中出现踪黄色位冒为阳性反应部位，表明该部分有仙应抗版与所用抗体结合，??色指示细胞核Ｗ及细胞质中的嗜碱性物质。山阁２可见，细胞表现山对Ｆ４／８０抗??阳性反应，且特巧巧衷达在细胞膜，说明细胞表面有表皮生长因子样激素受体１。??药物最适浓度结果??经试验并对试验数据进行处理后确定各药物的最大安全浓度（可使９０％Ｗ上的??／２细胞巧常存活的药物浓度）为：绿原酸的最大安全浓度为２５０?＾１３／１１止，连翔醋昔??最大安全浓度为１２５ｉ／ｍＬ，表告依春的最大安全浓度为１０００ｙｇ／ｍＬ。??

ｐｏｓｉｔｉｖｅ．（Ｂ）?Ｉｎｓｔｅａｄ?ｏｆ?Ｍ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｏｆ?ＰＲＲＳＶ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｗｉｔｈ?ＰＢＳ?ａｓ?ａ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｄｉｄ?ｎｏｔ?ａｐｐｅａｒ??ｐｏｓｉｔｉｖｅ．??由图３可见，攻毒后３Ｄ４／２细胞出现了化性反应。目前的研究衷明，巨峰细胞本??身具有巧晦能力，但巨晦细胞将病毒吞晦后所俘化的部位应该屆细胞质而非细胞核，??试验结果中可Ｗ看到细胞核中也出现阳性反应，说明出现阳性反应不仅仅是吞嘘所致，??也存在ＰＲＲＳＶ对巨略细胞的主动侵染，其侵染部位包括细胞核。??４小结??细胞免疫化学的结果衷明，ＰＲＲＳＶ能够对３Ｄ４／２细胞进行侵染，攻毒后能够使??３Ｄ４／２细胞产生病变。说明３Ｄ４／２细胞能被ＰＲＲＳＶ感染，并且观察到病毒的侵染部位??是细胞核和细胞质。??－２１?－??

【参考文献】：
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博士论文
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本文编号：2980822