清热解毒药抗金黄色葡萄球菌黏附乳腺上皮细胞机理研究

发布时间：2021-01-19 01:32

　　试验通过乳腺基部注射金黄色葡萄球菌悬液感染小鼠乳腺诱发乳腺炎，并用金银花和/或连翘三种清热解毒药对金黄色葡萄球菌诱发的小鼠乳腺炎进行预防和治疗，同时分别用EGFP标记E.coli BL21菌株和奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌标准菌株黏附奶牛乳腺上皮细胞制作细菌黏附细胞模型，共同探讨金黄色葡萄球菌感染乳腺的致病机理，以及金银花、连翘防治乳腺炎的作用机理、清热解毒药抗金黄色葡萄球菌黏附乳腺上皮细胞作用机理。采用组织块接种法结合胰酶消化体外分离培养荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞，当细胞长满培养孔底80%左右时，用胰酶经过2-3次差时消化培养的原代细胞即得到纯化的乳腺上皮细胞，对细胞角蛋白18的表达进行检测，鉴定结果显示阳性，即所培养的细胞为上皮型。且奶牛乳腺上皮细胞在波长为514nm光激发下，细胞发出红色荧光。证明乳腺上皮细胞具有自发荧光的特性。利用奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌和EGFP标记E.coli BL21感染乳腺上皮细胞，制作细菌菌黏附乳腺细胞的模型，革兰氏染色法、E.coli BL21经IPTG诱导发荧光后，利用普通光学显微镜、激光共聚焦显微镜和电子扫描显微镜观察：奶牛乳腺上皮细胞胞质被染成浅粉... 

【文章来源】：新疆农业大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

培养2-3d贴壁后游离出的细胞（40×）

组织块一般在48 h内可全部贴壁，培养2-3 d，少量细胞先从组织块周围游离出来，细胞形态呈梭形或放射状，为成纤维细胞，图2-1；也有部分组织块周围游离出来细胞呈不规则的多边形，为乳腺上皮细胞，图2-2。培养5-6 d，以组织块为中心，组织块周围出现细胞生长呈规则毛流样。外层为成纤维细胞，内层为乳腺上皮细胞，图2-3；组织块周围直接游离出乳腺上皮细胞的生长为“煎荷包蛋”状，图2-4；培养8-10 d，绝大多数组织块间细胞呈对数生长，数量显著增多，形成集落，呈单层“铺路石”状生长，细胞长满培养板孔底80%左右，图2-5。经2-3次差时消化纯化细胞后可见均匀“铺路石”状的乳腺上皮细胞，图2-6。在上皮细胞培养过程中

图 2-1 培养 2-3 d 贴壁后游离出的细胞（40×） 图 2-2 培养 2-3 d 直接出现乳腺细胞（40×）Fig. 2-1 Free out cell in 2-3 days after adherent（40×） Fig. 2-2 Mammary cell in 2-3d days (40×)图2-3 培养5-6 d分层的细胞（40×） 图2-4 培养5-6 d出现“煎荷包蛋状”（40×）Fig. 2-3 Layered cellsl in 5-6 days (40×) Fig. 2-4 “Fried egg shape” cell in 5-6 days (40×)图2-5 80%汇合的单层细胞（40×） 图2-6 纯化后“铺路石”状上皮细胞（100×）Fig. 2-5 80% confluent monolayer cells (40×) Fig. 2-6 “Cobblestone”-like epithelial cell (100×)


本文编号：2986066