非洲马瘟病毒可视化RT-LAMP现场检测方法的建立

发布时间：2021-01-19 04:06

　　为建立非洲马瘟病毒（AHSV）可视化RT-LAMP检测方法,本研究根据AHSV外衣壳蛋白（VP7）基因保守序列设计2对特异性引物,通过反应条件优化建立了AHSV可视化RT-LAMP检测方法。结果显示,本实验所建立RT-LAMP方法的最佳反应条件为62℃1 h;利用该方法检测进口灭活冻干疫苗中的9个血清型AHSV以及马流感病毒、马传贫病毒、马动脉炎病毒和蓝舌病病毒的RNA,结果显示所有血清型AHSV RNA检测均为阳性,其它病毒RNA检测为阴性,该方法特异性较强;该方法最低可检测到3.2×10^-9ng/μL的RNA,敏感性是普通RT-PCR方法的1 000倍。利用建立的RT-LAMP方法和普通RT-PCR方法对35份马血和5份驴血样品同时进行检测,结果显示二者阳性和阴性符合率均为100%。本研究在国内外首次建立了AHSV 9种血清型的可视化RT-LAMP检测方法,其具有特异性强、敏感性高、快速和高通量检测的优点,为非洲马瘟（AHS）快速的可视化现场诊断提供可行方法。 

【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(06)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

AHSV RT-LAMP最佳反应体系和反应条件下的试验结果

AHSV RT-LAMP特异性试验结果

用建立的RT-LAMP方法和RT-PCR方法同时对不同稀释度AHSV RNA样品进行检测，结果显示RT-LAMP最低RNA检测浓度为3.2×10-9ng/μL（图3 A、B);RT-PCR最低检测RNA浓度为3.2×10-6ng/μL（图3C),RT-LAMP敏感性为RT-PCR的1 000倍。表明该RT-LAMP的敏感性较高。2.4 临床样品检测结果

【参考文献】：
期刊论文
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[3]3型鸭甲型肝炎病毒逆转录环介导等温扩增技术快速检测方法的建立[J]. 张映,范书才,张兵,陈玲,秦义娴.  中国预防兽医学报. 2016(12)
[4]非洲马瘟病毒TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 赵文华,杨仕标,李富祥.  中国兽医科学. 2013(11)
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本文编号：2986307