嵌合型口蹄疫病毒样颗粒构建、表达及鉴定

发布时间：2021-01-19 05:56

　　为提高口蹄疫病毒（Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV）病毒样颗粒（Virus-likeparticles,VLPs）的特异性识别和递呈,为靶向疫苗研究奠定基础,利用反向PCR技术,将卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）第257–264位氨基酸（Amino acids,aa）的短肽嵌入FMDV结构蛋白VP3第171–172位aa或第173–174位aa,通过大肠杆菌表达FMDV结构蛋白VP0、VP1和嵌合型VP3,体外组装得到嵌合OVA257-264肽的病毒样颗粒（VLPOVA）。用动态光散射、透射电镜检测VLPOVA大小和形态,免疫印迹、酶联免疫吸附试验和激光共聚焦显微镜检测短肽的嵌入情况。结果显示在VP3的第173–174位aa嵌入OVA,不影响蛋白表达和VLPs的组装且OVA位于VLPOVA的表面,VLPOVA粒径比VLPs稍大。 

【文章来源】：生物工程学报. 2020,36(07)北大核心

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【部分图文】：

重组蛋白的Western blotting分析

ELISA法检测重组蛋白和VLPOVA中的OVA257-264

为了进一步确定OVA257-264肽正确嵌入VP3蛋白中，分别用培养基、VP3、VP3OVA173、VLPs和VLPOVA刺激培养第5天的BMDCs，培养24 h后，依次用猪血清、FITC标记的兔抗猪IgG抗体、APC抗鼠OVA257-264(SIINFEKL)肽连接H-2Kb抗体孵育细胞。激光共聚焦显微镜对FMDV结构蛋白和OVA257-264肽进行定位，结果发现，仅在VP3OVA173蛋白和VLPOVA中绿色荧光的结构蛋白和红色荧光的OVA257-264肽发生共定位，而VP3蛋白和VLPs中只检测到绿色荧光的结构蛋白(图4)，证明短肽正确嵌入FMDV VP3，且随VP3蛋白酶切、组装到VLPOVA。3 讨论

【参考文献】：
期刊论文
[1]VP3 G–H环中氨基酸突变对O型口蹄疫病毒生物学特性的影响[J]. 陈冬冬,白兴文,宫晓华,包慧芳,李平花,李冬,付元芳,白启峰,袁红,孙普,马雪青,曹轶梅,陈应理,卢曾军,刘在新.  微生物学报. 2019(07)

硕士论文
[1]口蹄疫病毒VP3定点突变体的构建及其生物学特性和免疫血清学研究[D]. 陈冬冬.中国农业科学院 2018



本文编号：2986461