鸭前脂肪细胞分化调控及FAS与SCD1基因的克隆与表达

发布时间：2021-01-20 07:02

　　脂肪组织是禽类脂质沉积的主要部位,在稳定机体代谢平衡中发挥重要作用。前脂肪细胞是一类具有增殖和定向分化为脂肪细胞的前体细胞,目前关于水禽前脂肪细胞的体外培养及其分化调控还缺乏系统的认识。本研究以北京鸭为试验材料,首次分离培养鸭前脂肪细胞,摸索最佳诱导方式,建立一个体外诱导细胞分化的模型；其次,利用体外分离培养前脂肪细胞的模型,分别研究了罗格列酮（RSG）、胰岛素和地塞米松（DEX）三种因素对鸭前脂肪细胞分化的调控机理。最后,克隆脂肪分化关键基因FAS和SCD1,检测其发育性表达模式,初步探讨二者在脂肪分化过程中的作用。本研究取得的主要结果和结论如下：（1）以一周龄农华肉鸭皮下脂肪组织为材料,用胶原酶消化法可以分离培养出较多的成分均一原代前脂肪细胞。鸭前脂肪细胞在接种后的第三天开始迅速增殖,第七天后细胞生长进入平台期。在胰岛素,DEX,IBMX和油酸的共同诱导下,梭形的前脂肪细胞,经过8天的诱导,大多数细胞分化为圆形的成熟脂肪细胞。此时细胞内沉积大脂滴,油红O染色为红色证实细胞已分化成熟。鸭前脂肪细胞分化过程中,C/EBPα表达量呈上升趋势,并在分化第五天达到峰值,然后再降低；PPARγ... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：133 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－１脂肋分化的转录调控网络??Ｆｉｇ．?１－１?Ａ?ｃｏｍｐｌｅｘ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ?ｃａｓｃａｄｅ?ｉ＊ｅｇｕｌａｔｅｓ?ａ出ｐｏ呂ｅｎｅｓｉｓ??（ａ）两?

图１－２细胞外因素对脂肋分化的调控??Ｆｉｇ．?１－２?Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｄｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ?ｂｙ?ｅｘｔｒａｃｅｌ山ｌａｒ?ｆａｒｔｏｒｓ??５参与脂肋细胞分化的重要基因??５．１?ＦＡＳ??脂肪酸合酶（ｆａｔｔｙ?ａｃｉｄ?ｓｙｎｔｈａｓｅ，?ＦＡＳ）是脂肪从头合成途径的关键酶，可Ｗ利用糖??代谢产生的乙酷辅酶Ａ和丙二酸单瞒辅酶Ａ催化合成饱和脂肪酸，其主要产物是１６个Ｃ的??栋楠酸份包含两个亚基，每个亚基含有７个不同功能的结构域，反别是；??Ｐ－ｋｅｔｏａｃｙｌ?ｓｙｎｔｈａｓｅ?（ＫＳ）、ｍａｌｏｎｙｌ／ａｃｅｔｙｌ?ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ?（ＭＡＴ）、ｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅ?（ＤＨ）、ｅｎｏｙｌ??ｒｅｄｕｃｔａｓｅ?（ＥＲ）、Ｐ－ｋｅｔｏａｃｙｌ?ｒ＊ｅｄｕｃｔａｓｅ?（ＫＲ）、ａｃｙｌ?ｃａｒｒｉｅｒ?ｐｒｏｔ；ｅｉｎ?（ＡＣＰ））臥及ｔｈｉｏｅｓｔｅｒａｓｅ??（ＴＥ），其中ＴＥ结构域对ＦＡＳ基因的功能起关键作用ｔｉＭ’ｉＷ。作为脂肪合成的关键酶，??ＦＡＳ在脂肪生成的组织高度表达，如肝脏和脂肪组织，也能在哺乳期的乳腺组织中有表??达ＵＭｌ。Ｅ４Ｓ基因ｍＲＮＡ表达水平的高低通常作为衡量组织或者细胞中脂肪酸合成能力的??指标在咕齿类和哺乳动物，似Ｓ的表达水平与机体脂肪含量呈正相关脂??

?‘??３．?２巧前脂肪细胞生长曲线绘制??图２－２反映了体外培养的鸭原代前脂肪细胞的生长曲线。如图２－２所示，在前Ｈ天，??鸭前脂肪细胞的生长处于潜伏期，此阶段细胞生长缓慢。从第四天开始，直到第４：天，??细胞増殖迅速，细胞活性虽著増强，此阶段为细胞增殖的对数期。从第八天开始，细胞??生长进入平台期，此阶段细胞活性渐渐趋于稳定。培养第九天之后，细胞活性开始下降。??２９??


本文编号：2988612