乙型脑炎病毒感染U251细胞microRNA表达谱的研究

发布时间：2021-01-23 01:13

　　乙型脑炎病毒（JEV）属于黄病毒科黄病毒属的成员,是一种危害严重的人畜共患病病原。该病毒严重危害人类健康,感染人后入侵中枢神经系统,造成死亡或者是留下严重的神经系统后遗症。同时它可以感染猪群,造成种猪繁殖障碍,最终导致养猪业的巨大经济损失。miRNA是基因在转录后水平调控的一种重要方式,在细胞生长、分化、细胞凋亡及代谢等生命过程中都起着重要作用。miRNA在病毒感染入侵及宿主细胞的抗病毒等方面也发挥着调节作用。而目前对于JEV诱导细胞niRNA表达谱的研究暂无报道,相关研究对于深入认识JEV的致病机制十分重要。本研究具体内容如下：将JEVP3和SA14-14-2毒株分别感染U251细胞后,提取总RNA,通过solexa测序技术,鉴定出JEV诱导U251的miRNA表达谱的变化情况,发现了其表达谱的基本特征。与对照组相比,有161个miRNA在JEV P3感染时发生了改变,175个miRNA在JEV SA14-14-2感染时发生了改变。而与SA14-14-2感染相比,P3感染诱导了76个miRNA的改变,其中60个miRNA表达上调,16个miRNA表达下调。通过实时荧光定量PCR对部分... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
縮略语表（Abbreviation）
1 文献综述
    1.1 乙型脑炎病毒简介
        1.1.1 引言
        1.1.2 乙型脑炎的流行病学
        1.1.3 JEV的病原学特征
        1.1.4 病毒的基因结构和功能
        1.1.5 病毒的理化特性
        1.1.6 病毒复制
        1.1.7 致病机理
    1.2 miRNA研究进展
        1.2.1 miRNA的产生
        1.2.2 miRNA的作用方式
        1.2.3 miRNA与病毒
        1.2.4 病毒编码的miRNA
        1.2.5 miRNA的研究方法
2 研究目的与意义
3 材料与方法
    3.1 实验材料
        3.1.1 毒株、菌株及细胞系
        3.1.2 质粒
        3.1.3 主要药品及试剂
        3.1.4 主要培养基及其配制
        3.1.5 主要缓冲液（溶液）及其配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 病毒感染
        3.2.2 细胞总RNA的提取
        3.2.3 RNA质量鉴定
        3.2.4 solexa高通量测序
        3.2.5 小RNA的生物信息学分析
        3.2.6 miRNA的验证
        3.2.7 靶基因的获得
        3.2.8 重组质粒的构建
        3.2.9 突变体报告质粒的构建
        3.2.10 双荧光素酶报告实验
        3.2.11 miRNA转染
        3.2.12 病毒基因的qPCR检测
        3.2.13 Western blot检测
        3.2.14 空斑实验
        3.2.15 统计学方法
4 结果与分析
    4.1 RNA样品的准备
    4.2 深度测序结果
        4.2.1 数据统计
        4.2.2 sRNA的长度分布及首位碱基偏向性
        4.2.3 差异表达的miRNA
    4.3 miRNA的qPCR验证
    4.4 miRNA与病毒的互作
        4.4.1 靶向JEV基因组的miRNA的预测
        4.4.2 miRNA靶标的构建
        4.4.3 双荧光素酶报告基因检测
        4.4.4 miR-487b作用位点的确定
        4.4.5 miR-487b下调病毒RNA水平
        4.4.6 miR-487b抑制病毒蛋白表达
        4.4.7 miR-487b降低病毒滴度
5 讨论
    5.1 侵染细胞和研究方法的选择
    5.2 miRNA对天然免疫的调节
    5.3 JEV编码的miRNA
    5.4 miRNA对病毒的抑制作用
    5.5 miRNA应用于动物实验
6 结论
参考文献
致谢
附录



本文编号：2994249