Coenzyme Q10在小鼠卵母细胞体外老化过程中的作用

发布时间：2021-01-23 06:01

　　卵母细胞排卵后老化不仅是体外受精率低、胚胎发育差的重要原因,也是影响辅助生殖技术研究的原因。辅酶Q10（Coenzyme q10）是细胞线粒体中电子传递链和有氧呼吸的参与物质之一,通过保护细胞免受自由基氧化损伤和降低细胞细胞凋亡从而在细胞抗氧化系统中发挥重要作用,而辅酶Q10在卵母细胞老化过程中的作用鲜有研究报道。因此研究辅酶Q10抑制小鼠卵母细胞排卵后体外老化的机制是非常有意义的。本研究以昆白小鼠超数排卵即注射hCG时13 h取的卵母细胞在体外培养的过程中建立氧化应激实验模型;分别体外裸卵培养6 h、12 h、24 h并且在体外延长培养的过程中在培养液里添加0μM、1μM、5μM、10μM不同浓度的辅酶Q10;采用胚胎活检、孤雌激活、IVF-ET、免疫荧光染色（IF）等技术,研究辅酶Q10在卵母细胞体外老化过程中的作用。结果表明,在体外延长培养12小时后,卵母细胞碎裂程度较未老化卵母细胞明显升高（93.07%vs.51.59%）;纺锤体异常率明显升高（51.42%vs.10.25%）;卵母细胞膜电位降低、线粒体分布不均匀较明显异常。并且老化老母细胞ATP合成量降低以及老化相关的SIR... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
文献综述
    第一章 卵母细胞排卵后老化的研究进展
        1.1 排卵后卵母细胞老化的定义
        1.2 老化卵母细胞的细胞和分子变化
        1.3 排卵后老化对胚胎发育的影响
        1.4 老化卵母细胞中ROS升高的原因
            1.3.1 线粒体缺陷
            1.3.2 培养条件
            1.3.3 抗氧化能力和ROS代谢能力的降低
            1.3.4 Sirtuin家族蛋白表达变化
        1.5 预防排卵后老化的方法
            1.5.1 抗氧化剂处理
            1.5.2 线粒体替代疗法
    第二章 辅酶Q10的研究进展
        2.1 辅酶Q10 的介绍
        2.2 辅酶Q10 的生物活性
        2.3 辅酶Q10 抗氧化的作用机理
        2.4 辅酶Q10 与线粒体ATP产量的关系
        2.5 老化卵母细胞线粒体的异常
        2.6 SIRT4 研究进展
        2.7 本研究的目的与意义
实验部分
    第三章 辅酶Q10对排卵后老化卵母细胞的影响
        3.1 试验材料
            3.1.1 试验动物
            3.1.2 试验仪器设备
            3.1.3 药品试剂
        3.2 试验方法
            3.2.1 实验试剂配制
            3.2.2 诱导超数排卵处理流程
            3.2.3 收集M2 时期卵母细胞
            3.2.4 精子的获能及体外受精
            3.2.5 卵母细胞免疫荧光染色
            3.2.6 Annexin-V凋亡检测
            3.2.7 数据分析
        3.3 实验结果
            3.3.1 辅酶Q10 降低老化卵母细胞的碎裂程度
            3.3.2 辅酶Q10 降低老化卵母细胞中的ROS积累
            3.3.3 辅酶Q10 维持卵母细胞纺锤体的正常形态
            3.3.4 辅酶Q10 抑制排卵后卵母细胞老化过程中的细胞凋亡
            3.3.5 辅酶Q10 提高老化卵母细胞的囊胚率
        3.4 讨论
    第四章 辅酶Q10对老化卵母细胞线粒体功能的影响
        4.1 试验材料
            4.1.1 试验动物
            4.1.2 主要仪器设备
            4.1.3 主要试剂
        4.2 试验方法
            4.2.1 卵母细胞超排
            4.4.2 卵母细胞采集
            4.2.3 定量引物设计
            4.2.4 c DNA制备以及qRT-PCR
            4.2.5 蛋白Western Blot检测
            4.2.6 卵母细胞ATP浓度测定
            4.2.7 卵母细胞线粒体膜电位检测
            4.2.8 卵母细胞线粒体分布检测
            4.4.9 干扰片段的设计与合成
            4.2.10 卵母细胞显微注射
            4.2.11 数据分析
        4.3 试验结果
            4.3.1 辅酶Q10 提高老化卵母细胞线粒体膜电位ΔΨm
            4.3.2 辅酶Q10 维持老化卵母细胞中的线粒体的均匀分布
            4.3.3 辅酶Q10 维持老化卵母细胞中的ATP含量
            4.3.4 辅酶Q10 通过抑制SIRT4 的升高从而延缓排卵后卵母细胞的老化
        4.4 讨论
全文结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：2994689