DPV gJ基因主要抗原域表达及抗体制备

发布时间：2021-01-23 22:35

　　本论文对鸭瘟病毒（DPV）gJ基因进行了生物信息学分析,原核表达了gJ基因去跨膜区和信号肽的截段基因gJ（M）,并制备了截段基因表达蛋白的多克隆抗体,主要内容可归纳如下：1.鸭瘟病毒gJ基因的分子特性分析鸭瘟病毒gJ基因大小为1620bp,编码539个氨基酸,理论等电点为6.037。鸭瘟病毒gJ蛋白在其N端有信号肽,C端有一个跨膜区,阂值为0.5时共有32个潜在的磷酸化位点,这些位点包括15个丝氨酸位点,9个苏氨酸位点,8个酪氨酸预测位点。通过对gJ蛋白做二级结构预测,结果表明无规则卷曲的氨基酸含量高（占50.65%）,为蛋白抗原表位提供了良好的空间。其ORF含62个稀有密码子,含量占33.3%,包括9个连续的稀有密码子串。2.鸭瘟病毒gJ截段基因的原核表达及多克隆抗体的制备成功构建了gJ全基因和gJ截段基因的重组原核表达质粒pET-32a（+）-gJ口pET-32（+）-gJ（M）,并将其转化入大肠杆菌BL21（DE3）菌中。IPTG诱导结果表明gJ全基因不能有效表达,gJ截段基因高效表达,得到与预期蛋白大小一致的约为30kDa的不可溶性蛋白,免疫印迹结果表明表达蛋白可与兔抗DPV血... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
一、文献综述及选题目的意义
    1 疱疹病毒GJ基因及其编码蛋白的研究进展
        1.1 疱疹病毒GJ基因及其编码蛋白的特点
            1.1.1 gJ基因的序列特点
            1.1.2 gJ基因的基因类型
            1.1.3 gJ蛋白的特点
        1.2 GJ的表达和定位
        1.3 GJ基因及其编码蛋白的功能
            1.3.1 gJ与细胞凋亡
            1.3.2 gJ与病毒复制和转录
            1.3.3 gJ与抗原性
            1.3.4 gJ与病毒感染
        1.4 展望
    2 选题目的及意义
二、实验研究
    1 材料
        1.1 DPV GJ基因生物信息学分析
        1.2 DPV GJ基因原核表达及抗体制备
            1.2.1 菌株、毒株和载体
            1.2.2 实验动物
            1.2.3 主要试剂的配制
            1.2.4 主要仪器及设备
    2 方法
        2.1 DPV GJ基因生物信息学分析
            2.1.1 DPV gJ基因分子特性分析
            2.1.2 DPV gJ基因密码子偏爱性分析
        2.2 DPV GJ基因原核表达及抗体制备
            2.2.1 PCR扩增鸭瘟病毒CHv株gJ基因
            2.2.2 gJ全基因及截段基因的T克隆
            2.2.3 DPV gJ全基因及截段基因表达质粒的构建
            2.2.4 重组蛋白的诱导表达及鉴定
            2.2.5 兔抗重组表达蛋白高免血清的制备与纯化
    3 结果
        3.1 DPV GJ基因生物信息学分析
            3.1.1 核酸序列的分子特性分析
            3.1.2 蛋白质序列的分子特性分析
            3.1.3 DPV gJ基因密码子偏爱性分析
        3.2 DPV GJ基因的原核表达、纯化及其抗体制备
            3.2.1 目的基因的扩增及T克隆鉴定
            3.2.2 重组表达质粒的鉴定
            3.2.3 重组蛋白表达条件的优化
            3.2.4 表达产物的鉴定及纯化
            3.2.5 多克隆抗体的制备及鉴定
    4 讨论
        4.1 DPV GJ基因生物信息学分析
        4.2 DPV GJ基因主要抗原域蛋白表达及抗体制备
三、结论
参考文献
致谢
作者简介及攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]大肠杆菌感受态细胞转化能力影响因素的研究[J]. 纠敏,汪伦记,张敏.  安徽农学通报. 2007(16)
[2]影响伪狂犬病病毒同义密码子用法特点的因素分析[J]. 殷华平,郭万柱,徐志文,杨丽.  浙江大学学报(农业与生命科学版). 2007(03)
[3]伪狂犬病病毒基因编码区碱基组成与密码子使用偏差(英文)[J]. 马相如,肖少波,方六荣,陈焕春.  遗传学报. 2005(06)
[4]保存时间及温度对大肠杆菌感受态转化效率的影响[J]. 令利军,朱艳,王红梅,张艳萍,杨随庄,王敏,张正英.  生物技术通讯. 2004(01)
[5]鸭瘟病毒基因组核酸的制备[J]. 卢杏通,廖明,郭霄峰,赵明秋,刘穗,谢淑敏,辛朝安.  中国兽医科技. 2003(04)
[6]活性部位的柔性[J]. 邹承鲁.  生理科学进展. 2001(01)
[7]一种简单实用纯化腹水McAb方法——辛酸/硫酸铵法[J]. 刘晓波,蔡美英,王霞,李喜荣.  华西医科大学学报. 1999(04)

博士论文
[1]鸭瘟病毒gC基因的发现、原核表达和应用研究[D]. 徐超.四川农业大学 2008



本文编号：2996045