携肠球菌Ace抗原的铁蛋白纳米粒制备与免疫效果检测

发布时间：2021-01-24 18:24

　　为制备携肠球菌胶原蛋白黏附素Ace抗原表位的铁蛋白纳米颗粒,并评价其免疫效果,利用生物信息学软件预测Ace抗原表位,合成相应的基因片段,分别构建含有相应抗原表位基因与铁蛋白H亚基基因的融合表达载体,同时构建融合表达Ace蛋白和H亚基的质粒pET-32a-ace-H,分别转入大肠杆菌中进行融合表达。利用Western blot鉴定各重组融合蛋白的反应原性,并利用透射电镜观察目的蛋白表征。用重组铁蛋白纳米颗粒分别制备免疫原进行家兔接种试验,并定期检测家兔血清特异性抗体水平。结果显示,正确构建了6个Ace蛋白抗原表位基因与H亚基基因的融合表达载体pET-32a-ace1-H～pET-32a-ace6-H,其中pET-32a-ace1-H、pET-32a-ace3-H、pET-32a-ace5-H和pET-32a-ace6-H为可溶性表达载体。Western blot检测显示可溶性表达的4种融合蛋白均具有较好的反应原性。透射电镜图像显示,4种融合蛋白均形成了具有中空结构的铁蛋白纳米笼,其直径与天然铁蛋白类似;而融合蛋白Ace-H纳米笼没有中空结构,且直径比天然铁蛋白大。家兔免疫试验结果显示,6... 

【文章来源】：河南农业大学学报. 2020,54(04)北大核心

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试验材料
    1.2 重组质粒的构建与鉴定
    1.3 融合蛋白的表达与鉴定
    1.4 重组铁蛋白纳米颗粒免疫家兔试验
    1.5 统计学分析
2 结果与分析
    2.1 重组质粒的构建与鉴定
    2.2 重组蛋白表达与Western blot分析结果
    2.3 重组铁蛋白纳米颗粒免疫家兔后抗体水平检测结果
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]粪肠球菌Ace抗原表位预测及重组表位疫苗载体构建与表达[J]. 郭珍珍,和春昊,李滨洲,楚红燕,张晨昕,杨国宇,陈丽颖.  河南农业大学学报. 2019(03)
[2]3种常见致病菌重组表位疫苗设计及重组腺病毒载体的构建[J]. 林静,尚翠玲,李小慧,高珂珂,孟佳丽,李昕,金天明.  中国兽医学报. 2018(11)
[3]猪源铁蛋白重链亚基纳米粒的制备[J]. 李滨洲,和春昊,吴秋玲,郭珍珍,张留君,杨国宇,王亚宾,陈丽颖.  河南农业大学学报. 2018(03)
[4]不同粗蛋白质水平饲粮对高繁殖力猪新品系-HN生长性能及经济效益的影响[J]. 李生贵,王鹏飞,闫尊强,陈国顺,黄晓宇,杨巧丽,石海仁,滚双宝,魏万鹏.  甘肃农业大学学报. 2018(02)
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本文编号：2997714