过表达Six1对鸭成肌细胞蛋白质代谢相关基因表达的影响及调控途径初探

发布时间：2021-01-26 10:35

　　Six1是SIX转录因子家族（Sine oculis homeobox family, SIX）中重要的成员,在肌肉发生、生肌节形成及肌纤维类型分化等过程中起着重要作用。另外,Six1与其协同因子Eya2能直接上调mTOR的表达,诱导蛋白质的合成代谢增强,引起心肌生理性肥大,表明Six1在肌肉蛋白质合成代谢过程中也发挥着重要的作用。但目前关于Six1与肌肉蛋白质代谢的具体调控机制还未见报道。本研究通过鸭成肌细胞转染真核表达载体pEGFP-duSix1,分析过表达Six1基因对细胞增殖活性及细胞蛋白质代谢的影响。同时为深入探讨Six1是否对蛋白质合成的相关基因PI3K、mTOR具有调控作用,采用其特异性抑制剂LY294002、雷帕霉素处理鸭成肌细胞,再过表达Six1基因,探讨Six1基因在细胞蛋白代谢过程中可能存在的具体调控途径。结果表明：1、利用真核表达载体pEGFP-duSix1转染鸭成肌细胞,发现Six1基因的mRNA表达量极显著高于对照组（P<0.01）,细胞增殖活性明显上升（P<0.05）,同时mTOR、S6K1的mRNA表达水平显著上调（P<0.05）。We... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
常用词语英文缩写
前言
1 文献综述
    1.1 Six1基因在肌肉发育的功能研究
    1.2 调节肌肉蛋白质代谢信号通路
        1.2.1 蛋白质合成主要信号通路（PI3K/Akt/mTOR）
        1.2.2 蛋白质降解主要信号通路
    1.3 RNA/Protein比值与细胞蛋白合成代谢的关系
    1.4 Six1参与调节肌细胞蛋白质代谢
    1.5 研究目的及意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验样品
        2.1.2 药品和试剂
    2.2 试验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 总RNA提取及质量检测
        2.2.3 RNA的反转录反应
        2.2.4 引物设计及合成
        2.2.5 pEGFP-duSix1重组质粒的抽提及鉴定
        2.2.6 荧光定量PCR
        2.2.7 Western-blot
        2.2.8 RNA/protein比值
        2.2.9 试验数据分析
3 结果与分析
    3.1 pEGFP-duSix1真核表达载体鉴定
    3.2 转染pEGFP-duSix1对细胞蛋白代谢的影响
        3.2.1 转染及转染后鉴定结果
        3.2.2 转染pEGFP-duSix1对细胞增殖活性的影响
        3.2.3 细胞转染Six1对相关基因表达量的影响
        3.2.4 细胞转染Six1对相关蛋白表达量的影响
        3.2.5 细胞转染Six1对细胞总蛋白合成的影响
    3.3 LY294002处理及转染pEGFP-duSix1对细胞蛋白代谢的影响
        3.3.1 LY294002处理后转染pEGFP-duSix1对细胞增殖活性的影响
        3.3.2 LY294002处理后转染pEGFP-duSix1对相关基因表达量的影响
        3.3.3 LY294002处理后转染pEGFP-duSix1对相关蛋白表达量的影响
        3.3.4 LY294002处理后转染pEGFP-duSix1对细胞总蛋白合成的影响
    3.4 Rapamycin处理细胞及转染pEGFP-duSix1对细胞蛋白代谢的影响
        3.4.1 Rapamycin处理后转染pEGFP-duSix1对细胞增殖活性的影响
        3.4.2 Rapamycin处理后转染pEGFP-duSix1对相关基因表达量的影响
        3.4.3 Rapamycin处理后转染pEGFP-duSix1对相关蛋白表达量的影响
        3.4.4 Rapamycin处理后转染pEGFP-duSix1对细胞总蛋白合成的影响
4 讨论
    4.1 Six1与蛋白合成相关基因的调控关系
    4.2 Six1与蛋白降解相关基因的调控关系
    4.3 LY294002处理对细胞蛋白代谢的影响
    4.4 Rapamycin处理对细胞蛋白代谢的影响
    4.5 Sixl可能通过调控mTOR影响细胞蛋白合成
5 结论
参考文献
致谢
硕士研究生学习期间发表文章


【参考文献】：
期刊论文
[1]运动与补充蛋白对骨骼肌产生的影响[J]. 韩萍,牛洁,张仁祥.  山西体育科技. 2009(04)
[2]Six1基因研究进展[J]. 郑秀惠,李力.  国际肿瘤学杂志. 2009 (12)
[3]mTOR/p70s6k通路与运动诱导的肌肉蛋白质合成[J]. 关尚一,张少生,李秋利,卢健.  中国组织工程研究与临床康复. 2009(24)
[4]流式细胞仪检测细胞体积及RNA/DNA比值[J]. 刘栋,刘志红.  肾脏病与透析肾移植杂志. 1999(03)



本文编号：3000959