Ihh-PTHrP信号轴在肉鸡股骨头坏死发生中的作用机理研究

发布时间：2021-01-27 17:24

　　肉鸡是选育程度最高的家禽之一。高强度的选育改善了生产性能,集约化的饲养管理方式降低了生产费用,使肉鸡的经济价值得到显著提升的同时也导致肉鸡腿病为代表的营养代谢病发病率居高不下。肉鸡腿病是一类疾病的统称,包括肉鸡股骨头坏死,肉鸡胫骨发育不良等等。肉鸡股骨头坏死的临床特征表现为跛行,因不能正常饮水和采食,病鸡常发生衰竭和死亡。该病不仅严重影响动物福利,导致的经济损失也相当可观。该病病因十分复杂,至今为完全阐明。根据大量流行病学统计分析、试验研究和临床观察,认为肉鸡股骨头坏死的发生与机体内外的诸多因素有关,其中最重要的是内部因素。内部因素中软骨内成骨异常是导致肉鸡股骨头坏死的最重要的因素之一。软骨内成骨受多种激素和细胞因子的调控。这些调控因子共同作用于生长板软骨细胞,调控软骨细胞的增殖、分化和成熟,影响股骨、胫骨等长骨的纵向生长。在诸多调控因子中,Ihh/PTHrP信号轴的作用十分关键,该信号通路的紊乱可致肉鸡股骨头坏死,然而该信号轴在肉鸡股骨头坏死病理发生中的作用机理,尚未见系统报道。本研究目的旨在建立肉鸡股骨头坏死动物模型,比较未发病肉鸡与股骨头坏死模型,生产性能变化,股骨近端生长板Ih... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：98 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词
前言
上篇 文献综述
    第一章 肉鸡股骨头坏死研究进展
        1 肉鸡股骨头坏死
        2 股骨头坏死病因和发病机制
            2.1 创伤性股骨头坏死
            2.2 非创伤性股骨头坏死
                2.2.1 脂肪代谢紊乱和脂肪栓子
                2.2.2 皮质类固醇类激素（Glucocorticosteroids,GCs）
                2.2.3 自愈作用
                2.2.4 血管发生抑制
                2.2.5 机械压力
                2.2.6 细胞凋亡
                2.2.7 血管内凝血
        3 临床症状
        4 病理变化
        5 小结
        参考文献
    第二章 软骨内成骨的调控
        1 间充质凝聚物（mesenchymal condensations,MCS）
        2 软骨细胞分化
            2.1 Sox蛋白
            2.2 胞外信号调节
        3 生长板生长发育
            3.1 生长板生长胞外调节因子
                3.1.1 甲状旁腺相关肽(（parathyroid hormone-related peptide,PTHrP）
                3.1.2 IHH
                3.1.3 PTHrP-Ihh信号轴负反馈调节系统
                3.1.4 FGF
                3.1.5 BMP
                3.1.6 WNT
                3.1.7 NOTCH
            3.2 核因子对生长板的调节
        4 小结
        参考文献
下篇 试验研究
    第三章 IHH/PTHRP信号轴在肉鸡股骨头坏死病理发生中的调控作用
        1 材料与方法
            1.1 主要仪器
            1.2 主要试剂
            1.3 试验动物
            1.4 样品采集
            1.5 生化指标检测
            1.6 骨指标测定
                1.6.1 骨指数测定
                1.6.2 骨放射密度测定
                1.6.3 骨强度测定
            1.7 实时荧光定量PCR检测相关基因mRNA相对表达量
                1.7.1 组织中Toatal RNA提取纯化
                1.7.2 样cDNA制备
                1.7.3 引物设计与合成
                1.7.4 Realtime PCR与结果分析
            1.8 石蜡切片制作及HE染色
                1.8.1 载玻片防脱片预处理
                1.8.2 组织脱钙处理
                1.8.3 脱水
                1.8.4 透明
                1.8.5 浸蜡与包埋
                1.8.6 切片
                1.8.7 HE染色
            1.9 免疫组织化学检测
        2 数据分析与统计
        3 结果与分析
            3.1 FHN评分统计结果
            3.2 体重、肝指数、采食量变化
            3.3 生化标志物变化
            3.4 骨生长参数统计结果
            3.5 VEGF、PTHrP、Ihh、GLI2、Bcl2、BMP6、MMP9等基因的表达变化
            3.6 组织学检测结果
                3.6.1 HE染色结果
                3.6.2 Ⅹ型胶原、Ⅱ型胶原免疫组织化学检测结果
        4 讨论
            4.1 甲泼尼龙建立肉鸡股骨头坏死模型
            4.2 诱导股骨头坏死模型骨指数和骨骼代谢标志物变化
            4.3 Ihh-PTHrP信号在FHN发生中的作用
        参考文献
    第四章 Ihh/PTHrP信号轴对肉鸡软骨细胞增殖、分化、
        1 材料和方法
            1.1 试验材料
                1.1.1 主要仪器和设备
                1.1.2 试验试剂
                1.1.3 试验动物
            1.2 软骨细胞原代培养
            1.3 MTT法检测细胞活性
            1.4 ALP活性检测
                1.4.1 二乙醇胺（DEA）缓冲液配制
                1.4.2 对硝基酚（PNP）标准液与裂解液TritonX-100配制配制
                1.4.3 ALP浓度测定
            1.5 实时荧光定量PCR检测软骨细胞相关基因mRNA相对表达量
                1.5.1 Total RNA的提取与纯化
                1.5.2 引物设计与合成
                1.5.3 荧光定量PCR
            1.6 蛋白免疫印迹检查蛋白相对表达量
                1.6.1 样品制备
                1.6.2 BCA法蛋白浓度测定：参照1.4.4
                1.6.3 样品处理
                1.6.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳
                1.6.5 转印
                1.6.6 免疫反应
                1.6.7 化学发光反应
                1.6.8 凝胶分析
        2 数据分析及统计
        3 结果与分析
            3.1 软骨细胞增殖活性（MTT）
            3.2 ALP活性检测结果
            3.3 PTHrP、Ihh和Ⅹ型胶原等基因的表达量变化
            3.4 Ihh、Ⅱ型胶原和Ⅹ型胶原蛋白表达量变化
        4 讨论
        5 小结
        参考文献
全文总结
攻读硕士期间发表论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]兔激素性股骨头坏死模型的建立[J]. 王泳,高春锦,杨晋才,武连华,李海东.  中国病理生理杂志. 2009(11)
[2]短期应用大剂量激素导致鸡股骨头坏死[J]. 程田,李月白,王义生.  郑州大学学报(医学版). 2009(02)
[3]间断应用激素法制备兔股骨头缺血性坏死模型[J]. 赵哲,王文波,李吉友,刘洋.  中国实验动物学报. 2008(04)
[4]激素性股骨头缺血性坏死发病机理的实验研究[J]. 王新生,许振华,陈风苞,张云汉,刘保民,崔全军,康文成.  中华骨科杂志. 1995(03)



本文编号：3003439