鸡胚生殖细胞减数分裂起始调控的研究
发布时间：2021-01-27 19:43
鸡胚常被用作发育生物学研究的动物模型,应用于深层次揭示动物发育的机理,尤其是生殖系统的发育,在实践中提高家禽的繁殖性能,在理论上阐明生殖细胞早期发育的调控机理。本实验以海兰鸡胚为材料,研究四个科学问题：①雌激素通过改变性腺的结构而影响生殖细胞性别发育的方向；②垂体-卵巢轴激素如何调控生殖细胞在有丝分裂和减数分裂起始之间的选择；③孕酮（P4）通过何种机制诱发生殖细胞减数分裂的起始；④碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是否参与调节卵巢内生殖细胞的发育。1.雌激素对生殖细胞发育方向的影响哺乳动物和鸟类生殖细胞减数分裂起始存在性别间差异,雌性生殖细胞于胚胎期起始减数分裂而雄性生殖细胞在胚胎期增殖后进入滞育阶段。早期生殖细胞减数分裂起始被认为可由性腺的结构所决定,但缺少体内的证据来证明。本研究使用雌激素（E2）和芳香化酶抑制剂（AI）处理进行性别逆转,改变性腺结构检测生殖细胞性别决定因素。结果表明：E2或AI处理均可引起性腺形态逆转；处理后两性卵巢样皮质内生殖细胞进入减数分裂状态,而精索状结构中均未见此现象发生。推测出现上述现象原因是E2和AI处理后使得性腺内中视黄酸（RA）浓度发生了改变。编码...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：113 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
1.1 减数分裂概况
1.1.1 减数分裂过程
1.1.2 卵子发生过程
1.1.3 精子的发生过程
1.2 生殖细胞减数分裂起始的调控
1.2.1 生殖细胞起始减数分裂的条件
1.2.2 RA起始减数分裂
1.2.3 调控减数分裂的其他因素
1.2.4 展望
1.3 鸡胚模型在生殖生理研究中的优势
1.3.1 易获取
1.3.2 体外发育,易于操作
1.3.3 内分泌研究时母体影响较小
1.3.4 转基因模型建立的优势
1.3.5 展望
1.4 本研究的目的和内容
1.4.1 研究的目的和意义
1.4.2 研究的目标和内容
第二章 雌激素对鸡胚性腺生殖细胞发育的影响
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 实验动物
2.2.2 主要器材
2.2.3 主要试剂及配制
2.2.4 胚胎处理及样品采集
2.2.5 性别鉴定
2.2.6 石蜡切片制作和形态学观察
2.2.7 免疫组织化学染色
2.2.8 冰冻切片免疫荧光染色
2.2.9 RNA提取
2.2.10 cDNA的合成
2.2.11 Real-time PCR
2.2.12 BrdU掺入鉴定生殖细胞的增殖
2.2.13 数据统计分析
2.3 结果
2.3.1 生殖细胞中的Dazl定位
2.3.2 雌激素处理后性腺的形态特征
2.3.3 卵巢皮质和卵巢样皮质内生殖细胞起始减数分裂
2.3.4 睾丸及睾丸精索状结构内生殖细胞保持有丝分裂状态
2.3.5 性腺内RA合成、代谢相关酶mRNA的表达变化
2.4 讨论
第三章 垂体-卵巢轴激素对卵巢生殖细胞发育的影响
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验动物
3.2.2 主要器材
3.2.3 主要试剂及配制
3.2.4 处理方法及组织收集
3.2.5 器官培养
3.2.6 RNA提取、cDNA合成及Real time PCR
3.2.7 Mi croRNA表达分析
3.2.8 免疫荧光共定位
3.2.9 BrdU掺入及检测
3.2.10 Western blot分析
3.2.11 统计分析
3.3 结果
3.3.1 FSH和LH调节生殖细胞减数分裂起始
3.3.2 FSH促进生殖细胞有丝分裂并延迟其减数分裂起始
3.3.3 促性腺激素调控miR181a及NR6A1 mRNA的转录
3.3.4 雌激素参与了FSH调节生殖细胞减数分裂及有丝分裂
4分泌调节减数分裂起始"> 3.3.5 LH通过P4分泌调节减数分裂起始
3.3.6 FSH在生殖细胞发育中启主导作用
3.4 讨论
第四章 孕酮在生殖细胞减数分裂起始中的作用
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 实验动物
4.2.2 主要器材
4.2.3 主要试剂及配制
4.2.4 处理方法及组织收集
4.2.5 器官培养
4.2.6 RNA提取,cDNA合成及Real time PCR
4.2.7 免疫荧光共定位
4.2.8 高效液相色谱分析
4.2.9 生殖细胞-体细胞共培养模型建立
4.2.10 RNA干扰
4.2.11 数据的统计分析
4.3 结果
4促进雌性生殖细胞减数分裂起始"> 4.3.1 P4促进雌性生殖细胞减数分裂起始
4促进体外雄性生殖细胞减数分裂起始"> 4.3.2 P4促进体外雄性生殖细胞减数分裂起始
4诱发减数分裂不依赖于PR"> 4.3.3 P4诱发减数分裂不依赖于PR
4促进生殖细胞减数分裂不依赖于RA"> 4.3.4 P4促进生殖细胞减数分裂不依赖于RA
4.4 讨论
第五章 碱性成纤维细胞生长因子对鸡胚卵巢生殖细胞发育的影响
5.1 引言
5.2 材料与方法
5.2.1 实验动物
5.2.2 主要器材
5.2.3 主要试剂及配制方法
5.2.4 器官培养
5.2.5 鸡胚内注射bFGF
5.2.6 RNA提取、cDNA合成及Real-Time RT-PCR
5.2.7 FGFR1原位杂交
5.2.8 Giemsa染色检测生殖细胞减数分裂状态
5.2.9 免疫荧光染色
5.2.10 BrdU掺入检测生殖细胞的增殖
5.2.11 数据的统计分析
5.3 结果
5.3.1 bFGF及FGFR mRNA在卵巢发育过程中的表达情况
5.3.2 RA促进生殖细胞减数分裂起始
5.3.3 bFGF对RA引发的减数分裂起始的抑制作用
5.3.4 bFGF促进生殖细胞增殖
5.4 讨论
第六章 成鸡卵巢生殖细胞再生的探索
6.1 引言
6.2 材料与方法
6.2.1 实验动物
6.2.2 主要器材
6.2.3 主要试剂及配制方法
6.2.4 RNA提取、cDNA合成及Real-Time RT-PCR
6.2.5 免疫荧光染色
6.3 结果
6.3.1 成鸡卵巢中原始生殖细胞的检测
6.3.2 成年鸡卵巢表达生殖细胞减数分裂起始相关基因
6.4 讨论
第七章 提示和创新点
参考文献
致谢
博士期间发表文章
【参考文献】：
期刊论文
[1]Follicle-stimulating hormone promotes proliferation of cultured chicken ovarian germ cells through protein kinases A and C activation[J]. Hong-yun LIU1,Wei-dong ZENG1,Ai-ling CAO1,2,Cai-qiao ZHANG1 (1Key Laboratory of Animal Epidemic Etiology and Immunological Prevention of the Ministry of Agriculture,College of Animal Sciences,Zhejiang University,Hangzhou 310029,China) (2Xiaoshan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Hangzhou 311208,China). Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2010(12)
博士论文
[1]局部性促生长因子对鸡卵泡发育的调控及其机理的研究[D]. 林金杏.浙江大学 2011
本文编号：3003621
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：113 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
1.1 减数分裂概况
1.1.1 减数分裂过程
1.1.2 卵子发生过程
1.1.3 精子的发生过程
1.2 生殖细胞减数分裂起始的调控
1.2.1 生殖细胞起始减数分裂的条件
1.2.2 RA起始减数分裂
1.2.3 调控减数分裂的其他因素
1.2.4 展望
1.3 鸡胚模型在生殖生理研究中的优势
1.3.1 易获取
1.3.2 体外发育,易于操作
1.3.3 内分泌研究时母体影响较小
1.3.4 转基因模型建立的优势
1.3.5 展望
1.4 本研究的目的和内容
1.4.1 研究的目的和意义
1.4.2 研究的目标和内容
第二章 雌激素对鸡胚性腺生殖细胞发育的影响
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 实验动物
2.2.2 主要器材
2.2.3 主要试剂及配制
2.2.4 胚胎处理及样品采集
2.2.5 性别鉴定
2.2.6 石蜡切片制作和形态学观察
2.2.7 免疫组织化学染色
2.2.8 冰冻切片免疫荧光染色
2.2.9 RNA提取
2.2.10 cDNA的合成
2.2.11 Real-time PCR
2.2.12 BrdU掺入鉴定生殖细胞的增殖
2.2.13 数据统计分析
2.3 结果
2.3.1 生殖细胞中的Dazl定位
2.3.2 雌激素处理后性腺的形态特征
2.3.3 卵巢皮质和卵巢样皮质内生殖细胞起始减数分裂
2.3.4 睾丸及睾丸精索状结构内生殖细胞保持有丝分裂状态
2.3.5 性腺内RA合成、代谢相关酶mRNA的表达变化
2.4 讨论
第三章 垂体-卵巢轴激素对卵巢生殖细胞发育的影响
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验动物
3.2.2 主要器材
3.2.3 主要试剂及配制
3.2.4 处理方法及组织收集
3.2.5 器官培养
3.2.6 RNA提取、cDNA合成及Real time PCR
3.2.7 Mi croRNA表达分析
3.2.8 免疫荧光共定位
3.2.9 BrdU掺入及检测
3.2.10 Western blot分析
3.2.11 统计分析
3.3 结果
3.3.1 FSH和LH调节生殖细胞减数分裂起始
3.3.2 FSH促进生殖细胞有丝分裂并延迟其减数分裂起始
3.3.3 促性腺激素调控miR181a及NR6A1 mRNA的转录
3.3.4 雌激素参与了FSH调节生殖细胞减数分裂及有丝分裂
4分泌调节减数分裂起始"> 3.3.5 LH通过P4分泌调节减数分裂起始
3.3.6 FSH在生殖细胞发育中启主导作用
3.4 讨论
第四章 孕酮在生殖细胞减数分裂起始中的作用
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 实验动物
4.2.2 主要器材
4.2.3 主要试剂及配制
4.2.4 处理方法及组织收集
4.2.5 器官培养
4.2.6 RNA提取,cDNA合成及Real time PCR
4.2.7 免疫荧光共定位
4.2.8 高效液相色谱分析
4.2.9 生殖细胞-体细胞共培养模型建立
4.2.10 RNA干扰
4.2.11 数据的统计分析
4.3 结果
4促进雌性生殖细胞减数分裂起始"> 4.3.1 P4促进雌性生殖细胞减数分裂起始
4促进体外雄性生殖细胞减数分裂起始"> 4.3.2 P4促进体外雄性生殖细胞减数分裂起始
4诱发减数分裂不依赖于PR"> 4.3.3 P4诱发减数分裂不依赖于PR
4促进生殖细胞减数分裂不依赖于RA"> 4.3.4 P4促进生殖细胞减数分裂不依赖于RA
4.4 讨论
第五章 碱性成纤维细胞生长因子对鸡胚卵巢生殖细胞发育的影响
5.1 引言
5.2 材料与方法
5.2.1 实验动物
5.2.2 主要器材
5.2.3 主要试剂及配制方法
5.2.4 器官培养
5.2.5 鸡胚内注射bFGF
5.2.6 RNA提取、cDNA合成及Real-Time RT-PCR
5.2.7 FGFR1原位杂交
5.2.8 Giemsa染色检测生殖细胞减数分裂状态
5.2.9 免疫荧光染色
5.2.10 BrdU掺入检测生殖细胞的增殖
5.2.11 数据的统计分析
5.3 结果
5.3.1 bFGF及FGFR mRNA在卵巢发育过程中的表达情况
5.3.2 RA促进生殖细胞减数分裂起始
5.3.3 bFGF对RA引发的减数分裂起始的抑制作用
5.3.4 bFGF促进生殖细胞增殖
5.4 讨论
第六章 成鸡卵巢生殖细胞再生的探索
6.1 引言
6.2 材料与方法
6.2.1 实验动物
6.2.2 主要器材
6.2.3 主要试剂及配制方法
6.2.4 RNA提取、cDNA合成及Real-Time RT-PCR
6.2.5 免疫荧光染色
6.3 结果
6.3.1 成鸡卵巢中原始生殖细胞的检测
6.3.2 成年鸡卵巢表达生殖细胞减数分裂起始相关基因
6.4 讨论
第七章 提示和创新点
参考文献
致谢
博士期间发表文章
【参考文献】：
期刊论文
[1]Follicle-stimulating hormone promotes proliferation of cultured chicken ovarian germ cells through protein kinases A and C activation[J]. Hong-yun LIU1,Wei-dong ZENG1,Ai-ling CAO1,2,Cai-qiao ZHANG1 (1Key Laboratory of Animal Epidemic Etiology and Immunological Prevention of the Ministry of Agriculture,College of Animal Sciences,Zhejiang University,Hangzhou 310029,China) (2Xiaoshan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Hangzhou 311208,China). Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2010(12)
博士论文
[1]局部性促生长因子对鸡卵泡发育的调控及其机理的研究[D]. 林金杏.浙江大学 2011
本文编号：3003621
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3003621.html
