禽类特异的IncRNA基因pouAC22的克
发布时间：2021-01-27 20:56
长链非编码RNA （long non-coding RNA, lncRNA）是一类转录本长度超过200nt,在200nt-100kb之间的一类非编码RNA分子,位于细胞核内或胞浆内,在真核细胞内被普遍转录,但不具有或很少具有蛋白编码功能。目前对lncRNA的研究,特别是在禽类中还比较少。本实验利用RACE技术以及RT-PCR技术对在鸡上发现的一个未知功能的EST （Genebank Accn:CR406381.1）进行了了5’RACE和3’RACE扩增,并对得到的未知新基因序列进行生物信息学分析,利用RT-PCR以及荧光定量技术研究该新基因组织表达情况。本实验主要从以下三个部分进行试验研究。试验一为了得到该未知基因的全长cDNA序列,试验采用SMART RACE KIT （Clontech Laboratories Inc., USA）试剂盒对该基因进行全长克隆。实验结果如下：5’RACE扩增产物长度为1197bp,3’RACE扩增出现了4种不同的剪接体形式,分别为403bp、535bp、658bp、1310bp。将5’RACE及3’RACE序列结果进行校正后拼接,总共得到该新基因的4...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SMART?5’-RACE的原理
图2.1.2. 3. 2美光定量PCR技术1996年美国应HJ生物系统公司(AEBI)推山炎光定量PCR仪，实现了 PCR试的IS跃。由丁?其爲有特异性强、灵敏度高、重复性好、定M准确、速度快、全优点迅速成为分子生物学研究中的重耍工A.。从宵台焚光定量PCR仪的出现到年了，其应用范围也逐渐扩大，0前己广泛应用丁?动植物，细齒以及病毋基闪的成为分+生物学实验必备的仪器之一[49]。炎光定m PCR原理所谓焚光定量PCR技术，足指在PCR反应体系中加入突光集团，利用炎光时监测整个PCR过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法[59’51]。在突光定量PCR技术中有一个很重要的概念：Ct值。C代表Cycle，t代表thresh
3. 3. 1总RNA提取从丝毛乌骨鸡中提取卵巢组织，图3-1为提取的总RNA的结果，28S、ISS、5S条带淸晰，表明所提取的总RNA完整性较好，可)ti 丁?后续实验。28S —18S ?——?图3-1总RNA电泳检测Fig.3-1 Electrophoresis result of total RNA3.3.2 RACE 扩増3. 3. 2. 1 RACE扩增产物检测将提取的总RNA按照RACE试剂盒耍求，分别进行5’RACE (图3-2A)和3’RACE扩增（图3-2B)。扩增产物进行1.2%的琼脂糖屯泳检测，。18
【参考文献】：
期刊论文
[1]长链非编码RNA的作用机制及其研究方法[J]. 夏天,肖丙秀,郭俊明. 遗传. 2013(03)
[2]长链非编码RNA及其在医学、家畜方面的研究进展[J]. 李托,徐华荣,王昕. 中国畜牧兽医. 2012(12)
[3]长链非编码RNA及其与肿瘤相关研究进展[J]. 张子臻,赵文毅,曹晖. 中华普通外科杂志. 2012 (11)
[4]非编码长链RNA与基因表达调控[J]. 史华俊,刘忠,郭俊明. 中国生物化学与分子生物学报. 2012(09)
[5]长链非编码RNA与前列腺癌[J]. 郭辉,傅强. 上海医学. 2012(05)
[6]长链非编码RNA与肿瘤研究进展[J]. 朱雯,王朝霞. 中国肿瘤临床. 2012(08)
[7]长链非编码RNA的功能与疾病[J]. 武志娟,钟金城. 中国生物化学与分子生物学报. 2012(03)
[8]长链非编码RNA的研究进展[J]. 刘娜娜,李少林,罗治彬. 广东医学. 2011(22)
[9]荧光定量PCR技术原理及在分子诊断中的应用进展[J]. 张金波,罗佳滨,张春斌,朱金玲,吕冬霞. 中国优生与遗传杂志. 2006(12)
[10]实时荧光定量PCR的应用和进展[J]. 付春华,陈孝平,余龙江. 激光生物学报. 2005(06)
本文编号：3003718
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SMART?5’-RACE的原理
图2.1.2. 3. 2美光定量PCR技术1996年美国应HJ生物系统公司(AEBI)推山炎光定量PCR仪，实现了 PCR试的IS跃。由丁?其爲有特异性强、灵敏度高、重复性好、定M准确、速度快、全优点迅速成为分子生物学研究中的重耍工A.。从宵台焚光定量PCR仪的出现到年了，其应用范围也逐渐扩大，0前己广泛应用丁?动植物，细齒以及病毋基闪的成为分+生物学实验必备的仪器之一[49]。炎光定m PCR原理所谓焚光定量PCR技术，足指在PCR反应体系中加入突光集团，利用炎光时监测整个PCR过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法[59’51]。在突光定量PCR技术中有一个很重要的概念：Ct值。C代表Cycle，t代表thresh
3. 3. 1总RNA提取从丝毛乌骨鸡中提取卵巢组织，图3-1为提取的总RNA的结果，28S、ISS、5S条带淸晰，表明所提取的总RNA完整性较好，可)ti 丁?后续实验。28S —18S ?——?图3-1总RNA电泳检测Fig.3-1 Electrophoresis result of total RNA3.3.2 RACE 扩増3. 3. 2. 1 RACE扩增产物检测将提取的总RNA按照RACE试剂盒耍求，分别进行5’RACE (图3-2A)和3’RACE扩增（图3-2B)。扩增产物进行1.2%的琼脂糖屯泳检测，。18
【参考文献】：
期刊论文
[1]长链非编码RNA的作用机制及其研究方法[J]. 夏天,肖丙秀,郭俊明. 遗传. 2013(03)
[2]长链非编码RNA及其在医学、家畜方面的研究进展[J]. 李托,徐华荣,王昕. 中国畜牧兽医. 2012(12)
[3]长链非编码RNA及其与肿瘤相关研究进展[J]. 张子臻,赵文毅,曹晖. 中华普通外科杂志. 2012 (11)
[4]非编码长链RNA与基因表达调控[J]. 史华俊,刘忠,郭俊明. 中国生物化学与分子生物学报. 2012(09)
[5]长链非编码RNA与前列腺癌[J]. 郭辉,傅强. 上海医学. 2012(05)
[6]长链非编码RNA与肿瘤研究进展[J]. 朱雯,王朝霞. 中国肿瘤临床. 2012(08)
[7]长链非编码RNA的功能与疾病[J]. 武志娟,钟金城. 中国生物化学与分子生物学报. 2012(03)
[8]长链非编码RNA的研究进展[J]. 刘娜娜,李少林,罗治彬. 广东医学. 2011(22)
[9]荧光定量PCR技术原理及在分子诊断中的应用进展[J]. 张金波,罗佳滨,张春斌,朱金玲,吕冬霞. 中国优生与遗传杂志. 2006(12)
[10]实时荧光定量PCR的应用和进展[J]. 付春华,陈孝平,余龙江. 激光生物学报. 2005(06)
本文编号：3003718
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