禽源大肠杆菌的分离鉴定及iucB基因缺失菌株的构建

发布时间：2021-01-27 21:24

　　大肠杆菌是一类常见的人畜共患病病原菌。临床上分为肠内致病菌、肠外致病菌和共生菌三类。对于禽类而言,大肠杆菌可作为肠道内正常菌群存在,或存在于宿主粘膜表面。只有那些具有特定毒力特征且引起发病的菌株被认定为禽致病性大肠杆菌,它是家禽最常见的病原菌之一,大多引起肠道外感染,主要表现为呼吸道或全身性感染,引起一系列疾病最终引起死亡,造成严重的经济损失,同时大肠杆菌病还受环境及机体因素诱发产生。目前该病已跻身为危害养禽业的细菌性疾病之首。为了解鸡大肠杆菌的流行病学特点,本研究对武汉周边8个地区鸡大肠杆菌进行分离鉴定,通过血清分型、耐药表型、群系鉴定及毒力因子分析确定优势血清型的强毒菌株ACN003,并缺失其毒力基因iucB。本研究主要内容如下：一.鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药性等特性的研究1.自武汉周边鸡场送检的发病鸡中分离得到45株细菌。经糖发酵试验、IMVIC试验等生化试验及培养特性观察,证实获得的45株细菌为大肠杆菌。生化试验表明：45株菌均能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蜜二糖、山梨醇、甘露醇,不分解肌醇、纤维二糖、阿拉伯醇,部分菌株可分解卫矛醇、山梨糖、棉子糖、鼠李糖、蔗糖等。所有分得... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文縮略词表 （abbreviation）
第一章 前言
    1.1 禽大肠杆菌病研究进展
        1.1.1 禽致病性大肠杆菌病原学研究
        1.1.2 流行病学研究
        1.1.3 诊断
        1.1.4 疾病的防治
    1.2 禽大肠杆菌病疫苗研究进展
        1.2.1 灭活苗
        1.2.2 亚单位疫苗
        1.2.3 弱毒菌苗
第二章 研究目的和意义
第三章 临床分离鉴定禽大肠杆菌
    3.1 材料
        3.1.1 病料来源
        3.1.2 菌株
        3.1.3 培养基
        3.1.4 酶与试剂
        3.1.5 引物序列表
    3.2 方法
        3.2.1 细菌的分离
        3.2.2 大肠杆菌看家基因的扩增
        3.2.3 生理生化反应
        3.2.4 血清型鉴定
        3.2.5 分离菌株的群系鉴定
        3.2.6 毒力基因检测
        3.2.7 药敏实验
        3.2.8 分离菌株小鼠感染试验
    3.3 结果与分析
        3.3.1 病原菌分离培养
        3.3.2 看家基因扩增
        3.3.3 生化实验结果
        3.3.4 血清分型
        3.3.5 分离菌株群系鉴定
        3.3.6 毒力基因扩增
        3.3.7 药敏试验
        3.3.8 小鼠感染试验
第四章 基因缺失菌株的构建
    4.1 材料
        4.1.1 细菌菌株及质粒
        4.1.2 主要药品及试剂
        4.1.3 主要培养基的配制
        4.1.4 PCR引物的设计与合成
    4.2. 方法
        4.2.1 细菌的增殖及大肠杆菌基因组的提取
        4.2.2 禽大肠杆菌ACN003菌株iucB基因上下游同源臂的扩增与鉴定
        4.2.3 PCR产物的回收与纯化
        4.2.4 重组自杀性质粒pRE112△iucB的构建
        4.2.5 接合转移
        4.2.6 基因缺失株的筛选
        4.2.7 基因缺失突变菌株的小鼠感染试验
    4.3 结果
        4.3.1 iucB基因上下游同源臂的PCR扩增鉴定及重组质粒的鉴定
        4.3.2 单交换菌株的PCR鉴定
        4.3.3 iucB基因缺失突变株的筛选与鉴定
        4.3.4 小鼠感染试验
        4.3.5 感染后组织分菌鉴定结果
第五章 讨论
    5.1 鸡大肠杆菌的临床分离鉴定
        5.1.1 关于迟发酵乳糖型大肠杆菌的研究
        5.1.2 分离菌株的血清分型
        5.1.3 毒力基因的检测以及部分菌株的毒力试验
        5.1.4 分离菌株的耐药性分析
        5.1.5 分离菌株群系分析
    5.2 禽大肠杆菌基因缺失菌株的研究
第六章 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]鸡源致病性大肠埃希菌耐药基因及毒力基因检测研究[D]. 王利勤.西北农林科技大学 2012
[2]鸡源禽致病性大肠杆菌分离鉴定及其毒力相关基因分布特征分析[D]. 苏志新.南京农业大学 2011
[3]鸡致病性大肠杆菌FimC基因缺失菌株的构建及其生物学特性的研究[D]. 刘雪威.东北农业大学 2008
[4]临床分离鸡源性大肠杆菌分型及其耐药性检测和质粒DNA分析[D]. 韩伟.河北农业大学 2006
[5]我国部分地区243株禽源性大肠杆菌分离株的病原生物学特性[D]. 赵娟.扬州大学 2005



本文编号：3003758