鸡传染性支气管炎病毒Sczy3株的致弱及其免疫效力的评价

发布时间：2021-01-28 07:52

　　鸡传染性支气管炎（IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（IBV）引起的一种急性、高度接触传染性疾病,是危害养禽业的主要传染病之一。其血清型众多,且不同血清型之间的交叉反应小甚至不存在交叉反应,而且现有的商品化疫苗对流行毒株无法提供有效的免疫保护作用,使得IB在免疫鸡群仍不断流行传播。因此,在本地区流行毒株当中培育弱毒疫苗,对防治IB的发生和流行有重要的意义。Sczy3为本实验室2009年分离的一株LX4型IBV毒株,将其在非免疫鸡胚连续传至100代（P100）以致弱,希望制备出一株致病力减弱但具有良好免疫原性的IB疫苗株。试验结果显示：毒株在鸡胚传代过程中,病毒滴度逐渐升高,接种鸡胚出现典型病变,毒株能够高度适应鸡胚；与之相反,取不同代次毒进行动物试验,结果显示该毒株对非免疫雏鸡的致病力随着鸡胚传代次数的增加会逐渐降低。P100代毒接种鸡群后,未出现临床发病症状,发病率和死亡率均为0%,说明Sczy3毒株在鸡胚连续传至P100代时已充分致弱。为了观察四川地区近年来IBV的流行特点,本试验在2012-2013年期间对四川部分地区IBV进行了分离鉴定,共分离鉴定出10株IBV野毒株。对毒株S1基... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文缩略词对照表
第一部分 文献综述
    1 概论
        1.1 发生史
        1.2 病原学
            1.2.1 病原分类
            1.2.2 化学组成
            1.2.3 理化特性
            1.2.4 生物学特性
            1.2.5 病毒分型方法
        1.3 基因组结构
        1.4 结构蛋白
            1.4.1 N蛋白
            1.4.2 S蛋白
            1.4.3 M蛋白
            1.4.4 E蛋白
        1.5 临床症状
        1.6 病理变化
        1.7 病毒的分离和鉴定
            1.7.1 病毒的分离
            1.7.2 病毒的鉴定
        1.8 流行特征
            1.8.1 不断地出现新的变异株
            1.8.2 易感动物和宿主范围
            1.8.3 传播方式
            1.8.4 不同致病型毒株的发病特征
            1.8.5 并发和继发感染
    2 IB疫苗的研究进展
        2.1 IB灭活苗
        2.2 IB弱毒疫苗
        2.3 IB基因工程疫苗
            2.3.1 IB基因工程亚单位疫苗
            2.3.2 IB核酸疫苗
            2.3.3 IB重组疫苗
            2.3.4 IB转基因疫苗
    3 试验目的及意义
第二部分 试验内容
    第一章 IBV分离株SCZY3的鸡胚传代致弱
        1 材料
            1.1 试验动物、鸡胚和鸡红细胞
            1.2 毒株与菌株
            1.3 主要仪器
            1.4 主要试剂和试剂盒
            1.5 试剂的配制
            1.6 引物的设计
        2 方法
            2.1 鸡胚传代
            2.2 鸡红细胞凝集试验
            2.3 RT-PCR鉴定
                2.3.1 病毒总RNA的提取
                2.3.2 RT-PCR
            2.4 SCZY3不同代次毒的致弱评价
                2.4.1 病毒滴度测定
                2.4.2 SCZY3不同代次毒的致弱评价
        3 结果
            3.1 鸡胚传代
            3.2 尿囊液对鸡红细胞的凝集活性
            3.3 RT-PCR鉴定结果
            3.4 SCZY3不同代次毒的致弱评价
                3.4.1 病毒滴度的测定
                3.4.2 SCZY3不同代次毒的致病力
        4 讨论
    第二章 2012-2013年四川部分地区IBV的流行病学调查
        1 材料
            1.1 病料
            1.2 主要生化试剂
            1.3 试剂的配制
            1.4 引物的设计
        2 方法
            2.1 病毒的分离与鉴定
                2.1.1 病毒的分离
                2.1.2 病毒鉴定
            2.2 IBV分离株S1基因序列的测定
                2.2.1 病毒RNA提取
                2.2.2 RT-PCR扩增
                2.2.3 S1基因的TA克隆
                2.2.4 转化
                2.2.5 重组质粒的筛选和鉴定
            2.3 S1基因系统发育进化树分析
        3 结果
            3.1 病毒的分离与鉴定
                3.1.1 病毒的分离
                3.1.2 病毒的鉴定
            3.2 S1基因克隆测序结果
            3.3 IBV分离株S1基因序列的测定及基因型分析
        4 讨论
    第三章 SCZY3 P100免疫保护效力的评价
        1 材料
            1.1 试验动物
            1.2 毒株
            1.3 常用试剂
            1.4 试剂配制
        2 方法
50的测定">            2.1 EID₅₀的测定
            2.2 试验设计
            2.3 样品采集
            2.4 样品病毒分离
            2.5 间接ELISA检测抗体
            2.6 病理切片的制备
        3 结果
50的测定">            3.1 EID₅₀的测定
            3.2 SCZY3 P100免疫保护效力的评价
                3.2.1 发病鸡临诊症状、发病率及死亡率
                3.2.2 血清抗体变化及病毒分离结果
                3.2.3 攻毒后组织病理学变化
        4 讨论
结论
参考文献
致谢
附录



本文编号：3004626