猪流行性腹泻病毒Coe蛋白在黑曲霉和镰孢霉中的异源表达
发布时间:2021-01-28 19:49
黑曲霉(Aspergillus niger)是工业上常用于异源蛋白表达的生产菌株。镰孢霉(Fusarium venenatum) ATCC20334是近年来新发现的一种具有高效表达蛋白能力的丝状真菌。猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)是一种能够引起哺乳仔猪急性腹泻的猪流感病毒,而其coe基因编码的糖蛋白能够诱导机体产生中和抗体。本研究探索分别以黑曲霉ATCC1015和镰孢霉ATCC20334为表达宿主对coe基因进行异源表达进而构建疫苗表达系统。本论文主要研究结果如下:(1)分别比较镰孢霉、黑曲霉和米曲霉分泌的背景蛋白及蛋白酶活性。实验结果表明相比于黑曲霉和米曲霉,镰孢霉分泌较少的背景蛋白。而且,镰孢霉胞外分泌的蛋白酶活性显著低于黑曲霉和米曲霉的胞外蛋白酶活性。(2)利用显微镜分别观察黑曲霉和镰孢霉菌株在YPD和Vogel’s培养基里的发酵形态。观察结果显示黑曲霉的菌丝呈致密的球状,镰孢霉的菌体呈分散的菌丝体,而这更有利于胞外蛋白的分泌。同时显示黑曲霉或镰孢霉在YPD和Vogel’s培养基里的发酵形态一致。(3)应用基因工程技...
【文章来源】:天津科技大学天津市
【文章页数】:73 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
图1-1?PEDV病毒粒子结构模式图??
天津科技大学硕±学位论文整新鲜抱子的悬液抱子液浓度为106个/11止,取200?^11^涂布0、5、10、15p皆mL)的PDA培养基上。??C培养2d、3d、4d后观察菌落生长情况,确定潮霉素B对粒?pFGL巧-PgpdA-Ttrpc(pLH5。的构建??,WpFGL59PW为出发质粒构建表达载体,PFGL59质粒含抗性基因,分别作为大肠杆菌和丝状真菌的筛选标记。pFGL5复制起始位点,使其在大肠杆菌中可稳定存在并具有高拷W在根癌农杆菌中稳定的自我复制并分配到子代细胞中。该区,其作为外源基因的载体可W从农杆菌中转移并通过comb?im化n)稳定的整合到受体基因组。??-Kpn?I??
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【参考文献】:
期刊论文
[1]猪流行性腹泻病毒S基因片段的克隆及原核表达[J]. 王树坤,郎洪武,李轶女,陈晓春,张志芳. 生物技术进展. 2012(04)
[2]根癌农杆菌介导的黑曲霉遗传转化体系的建立及优化[J]. 黎明,刘萌,黄云雁,周丽颖,孙昕,路福平. 中国生物工程杂志. 2012(01)
[3]黑曲霉作为细胞工厂:知识准备与技术基础[J]. 郭艳梅,郑平,孙际宾. 生物工程学报. 2010(10)
[4]表达猪流行性腹泻病毒中和抗原位点的重组干酪乳杆菌免疫小鼠诱导的免疫应答[J]. 葛俊伟,姜艳平,汪淼,乔薪瑗,刘敏,唐丽杰,李一经. 中国兽医科学. 2010(07)
[5]Agrobacterium tumefaciens-mediated genetic transformation of the phytopathogenic fungus Penicillium digitatum[J]. Ji-ye WANG, Hong-ye LI (Institute of Biotechnology, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China). Journal of Zhejiang University(Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal). 2008(10)
[6]丝状真菌高效表达异源蛋白研究进展[J]. 钟耀华,王晓利,汪天虹. 生物工程学报. 2008(04)
[7]根癌农杆菌介导的烟曲霉转化条件的优化[J]. 龙朝钦,邓军,郝飞,钟白玉,周村建. 西部医学. 2008(02)
[8]根癌农杆菌介导的胶孢炭疽菌遗传转化体系的建立[J]. 李伟,郑肖兰,贺春萍,吴伟怀,李锐,郑服丛. 植物保护. 2008(01)
[9]丝状真菌异源蛋白表达系统研究进展[J]. 姜天一,朱平. 生物技术通讯. 2007(06)
[10]PEDV S蛋白B细胞抗原表位的筛选和鉴定[J]. 孙东波,朗洪武,时洪艳,陈建飞,崔晓辰,王承宝,佟有恩,冯力. 生物化学与生物物理进展. 2007(09)
硕士论文
[1]猪流行性腹泻病毒COE基因乳酸菌表达载体的构建与表达研究[D]. 董丽娜.吉林农业大学 2008
本文编号:3005585
【文章来源】:天津科技大学天津市
【文章页数】:73 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
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天津科技大学硕±学位论文整新鲜抱子的悬液抱子液浓度为106个/11止,取200?^11^涂布0、5、10、15p皆mL)的PDA培养基上。??C培养2d、3d、4d后观察菌落生长情况,确定潮霉素B对粒?pFGL巧-PgpdA-Ttrpc(pLH5。的构建??,WpFGL59PW为出发质粒构建表达载体,PFGL59质粒含抗性基因,分别作为大肠杆菌和丝状真菌的筛选标记。pFGL5复制起始位点,使其在大肠杆菌中可稳定存在并具有高拷W在根癌农杆菌中稳定的自我复制并分配到子代细胞中。该区,其作为外源基因的载体可W从农杆菌中转移并通过comb?im化n)稳定的整合到受体基因组。??-Kpn?I??
?基因coe根据黒曲霉密码子偏好性优化后命名为^cocoe,coe与v4cocoe的碱基对??比结果见图2-2,CAI由原先的0.79提升至0.98,优化coe碱基GC含量和稀有密码??子^^延长mRNA的表达,打破影响核糖体结合和1111。'1八稳定性的Sten>Loop结构,??同时FOD的值也有显著的提局。??miuni?V..;.??.?-?並;.1??Aft'坛;巧接〇'径rw?Opi;m这斯紛;?I??y王劳舞葦巧可"v**,电争穿.*?^畫舱叩化执专化巧?>賊;'沪专赖辛.W當誉卷||*^谢 ̄??P归:j::::!t::::[zlt:l:::现?1!4:?P画?||||謬|:|襲画齡辭哪:::I??吏?—"■—?***>-*-'*'*'******* ̄ ̄****一*'*'<__*?—??__?*_***?>?^?6〇?*? ̄?4?4? ̄? ̄??'I*?*?"t?fi?*I*F?-??g妖-#w—?三於!????■^?—II-—??——£————!.j_—??*■(絲^?*5?I??????—??-?然會??寺?**■->>■**???巧??>>??#.??々a*wv>w??會??.????9W4K9?1?WW??—??-?-??■*???■?????今"凝—'疯…―碱^^?從献'游「
【参考文献】:
期刊论文
[1]猪流行性腹泻病毒S基因片段的克隆及原核表达[J]. 王树坤,郎洪武,李轶女,陈晓春,张志芳. 生物技术进展. 2012(04)
[2]根癌农杆菌介导的黑曲霉遗传转化体系的建立及优化[J]. 黎明,刘萌,黄云雁,周丽颖,孙昕,路福平. 中国生物工程杂志. 2012(01)
[3]黑曲霉作为细胞工厂:知识准备与技术基础[J]. 郭艳梅,郑平,孙际宾. 生物工程学报. 2010(10)
[4]表达猪流行性腹泻病毒中和抗原位点的重组干酪乳杆菌免疫小鼠诱导的免疫应答[J]. 葛俊伟,姜艳平,汪淼,乔薪瑗,刘敏,唐丽杰,李一经. 中国兽医科学. 2010(07)
[5]Agrobacterium tumefaciens-mediated genetic transformation of the phytopathogenic fungus Penicillium digitatum[J]. Ji-ye WANG, Hong-ye LI (Institute of Biotechnology, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China). Journal of Zhejiang University(Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal). 2008(10)
[6]丝状真菌高效表达异源蛋白研究进展[J]. 钟耀华,王晓利,汪天虹. 生物工程学报. 2008(04)
[7]根癌农杆菌介导的烟曲霉转化条件的优化[J]. 龙朝钦,邓军,郝飞,钟白玉,周村建. 西部医学. 2008(02)
[8]根癌农杆菌介导的胶孢炭疽菌遗传转化体系的建立[J]. 李伟,郑肖兰,贺春萍,吴伟怀,李锐,郑服丛. 植物保护. 2008(01)
[9]丝状真菌异源蛋白表达系统研究进展[J]. 姜天一,朱平. 生物技术通讯. 2007(06)
[10]PEDV S蛋白B细胞抗原表位的筛选和鉴定[J]. 孙东波,朗洪武,时洪艳,陈建飞,崔晓辰,王承宝,佟有恩,冯力. 生物化学与生物物理进展. 2007(09)
硕士论文
[1]猪流行性腹泻病毒COE基因乳酸菌表达载体的构建与表达研究[D]. 董丽娜.吉林农业大学 2008
本文编号:3005585
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