奶牛隐性乳房炎无乳链球菌的分离鉴定及其BibA重组蛋白的表达与纯化

发布时间：2021-01-30 12:32

　　无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）是导致奶牛乳房炎的主要病原菌之一,属高度接触性传染的专性乳腺寄生菌,易引起隐性乳房炎,可导致持续性感染且很难自愈,给奶牛业造成了巨大的经济损失。无乳链球菌在人类医学上称B群链球菌（Group B Streptococci, GBS）,是一种对新生儿有生命威胁的常见菌,而如今人源和动物源无乳链球菌耐药现象都很严重；研究发现,无乳链球的部分毒力因子在其致病过程中发挥着重要作用。故本论文对3个奶牛场隐性乳房炎的致病菌进行了分离、鉴定和耐药性分析,选择无乳链球菌分离株的毒力因子BibA蛋白进行了体外表达和纯化研究,旨在为无乳链球菌免疫学检测方法的建立或无乳链球菌亚单位疫苗的研究提供技术资料。（1）利用16S rDNA序列分析方法结合细菌形态和生化特性分析,分离鉴定了3个奶牛场隐性乳房炎的主要致病菌,包括大肠杆菌、肠球菌、无乳链球和金黄色葡萄球菌等；对分离的无乳链球菌进行了血清型鉴定和耐药性分析,结果显示分离的无乳链球菌血清型为1a型,对青霉素、链霉素等常用抗生素耐药,对红霉素、四环素等抗生素较为敏感。（2）选择分离于临床的无乳链球菌... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 无乳链球菌与致病机制相关的毒力因子研究进展
        1.1.1 孔毒素
        1.1.2 促进免疫逃避的因子
        1.1.3 粘附因子
    1.2 本研究的目的和意义
第二章 奶牛隐性乳房炎病原菌的分离鉴定及无乳链球菌的耐药性分析
    2.1 材料
        2.1.1 牛乳收集
        2.1.2 主要试剂及材料
        2.1.3 溶液的配制
        2.1.4 主要仪器
    2.2 方法
        2.2.1 隐性乳房炎的检测及牛乳的收集
        2.2.2 细菌的分离培养
        2.2.3 细菌的DNA提取
        2.2.4 细菌16SrDNA扩增
        2.2.5 无乳链球菌的血清型鉴定
        2.2.6 无乳链球菌的的药物敏感性试验
    2.3 结果
        2.3.1 细菌的分离鉴定
        2.3.2 无乳链球菌的血清型鉴定
        2.3.3 无乳链球菌的药物敏感性实验
    2.4 讨论
        2.4.1 细菌的分离鉴定
        2.4.2 无乳链球菌的耐药试验
第三章 无乳链球菌BIBA基因的克隆及序列分析
    3.1 材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 主要试剂及材料
        3.1.3 主要仪器设备
    3.2 方法
        3.2.1 引物设计与合成
        3.2.2 BibA基因的PCR扩增
        3.2.3 目的基因的克隆与鉴定
        3.2.4 BibA基因片段的生物信息学分析
    3.3 结果
        3.3.1 BibA基因的克隆与鉴定
        3.3.2 BibA基因的生物信息学分析
    3.4 讨论
第四章 BIBA蛋白的表达与纯化
    4.1 材料
        4.1.1 菌株
        4.1.2 主要试剂及材料
        4.1.3 试剂的配置
        4.1.4 主要仪器设备
    4.2 方法
        4.2.1 表达载体的构建
        4.2.2 工程菌的构建
        4.2.3 BibA蛋白的诱导表达
        4.2.4 诱导条件的优化
        4.2.5 蛋白的纯化与复性
    4.3 结果
        4.3.1 重组表达质粒的鉴定
        4.3.2 BibA原核表达的可溶性分析
        4.3.3 目的蛋白的检测
        4.3.4 表达条件的优化
        4.3.5 蛋白的纯化与复性
    4.4 讨论
第五章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Ⅰa型和Ⅱ型牛源无乳链球菌sip基因的遗传进化分析[J]. 王旭荣,张世栋,杨峰,王国庆,杨志强,李建喜,李宏胜.  中国兽医科学. 2012(09)
[2]牛源性无乳链球菌血清型分布及抗生素耐药性研究[J]. 李宏胜,郁杰,罗金印,李新圃,徐继英,王旭荣,张礼华.  中国畜牧兽医. 2012(01)
[3]2型猪链球菌层粘连蛋白结合蛋白的原核表达及免疫原性检测[J]. 潘秀珍,邵珠卿,李先富,刘文静,王长军,唐家祺.  中国人兽共患病学报. 2011(07)
[4]LAMP检测无乳链球菌方法的建立及应用（英文）[J]. 王永,赵新,景海春,兰青阔,朱珠,程奕.  华北农学报. 2009(05)
[5]蛋白质电泳考马斯亮蓝G250染色方法改良[J]. 汪静,袁琳,陈晓明.  医学分子生物学杂志. 2006(06)
[6]奶牛乳房炎类型与病原菌感染之间相关性的研究[J]. 李宏胜,郁杰,李新圃,罗金印,徐继英,张礼华,潘虎,张志常,袁永隆,杨玉英,刘纯传,侯奕昭.  动物医学进展. 2004(06)

硕士论文
[1]B群链球菌表面蛋白FbsA的提取及免疫原性初步探讨[D]. 张学峰.北京生物制品研究所 2008



本文编号：3008907