缺氧调控奶牛子宫内膜上皮细胞表达BoLA-A和MIC1的研究
发布时间：2021-01-31 12:22
奶牛繁殖障碍是影响奶牛生产性能与经济效益的重要原因。在奶牛妊娠过程中,母体对胎儿的识别依赖于母胎界面组织相容性复合物（BoLA-I）的表达,这不仅影响着胚胎的正常着床,也影响着胎盘组织中相应免疫细胞的聚集、细胞因子的分泌,对维持妊娠和动物分娩都具有十分重要的调节作用。由于胎盘血管重塑及生长需要一定时间,因此胚胎在早期附植期间均处于缺氧环境中；随着滋养层细胞不断的侵袭,胎盘血管网逐渐建立起来,保证了胚胎的供氧,营养物质以及代谢产物在母体与胎儿之间进行正常交换。缺氧诱导因子（HIF）在缺氧状态下对血管形成的相关因子具有特异性的调节作用。HIF通过调节大量靶基因的表达,继而调节滋养层细胞侵润,血管重塑以及母体与胎儿血氧平衡过程。大量研究发现HIF-1α的表达是细胞缺氧的特异性标示物,而二氯化钴（CoCl2）可以作为一种诱导剂与HIF-1α中的氧依赖降解区（ODD）结合来诱发细胞缺氧,从而建立体外培养细胞缺氧模型。本试验首先利用CoCl2作用于体外培养奶牛子宫内膜上皮细胞（EEC）,建立了浓度-时间CoCh缺氧模型；采用荧光定量PCR检测不同缺氧状态下BoLA-A与MIC1的表达；将实验室已制...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
縮略语表
1 前言
1.1 BoLA-I研究进展
1.1.1 BoLA-A的结构与功能
1.1.2 MIC1的结构和功能
1.1.3 BoLA-I与奶牛妊娠免疫
1.2 缺氧环境与妊娠的关系
1.2.1 妊娠初期缺氧形成的原因
1.2.2 缺氧与HIF的关系
1.2.3 HIF与妊娠的关系
1.3 二氯化钴与缺氧的关系
1.4 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 试验动物
2.1.2 试验主要仪器设备
2.1.3 试验主要试剂
2.1.4 主要试剂配制
2.2 试验方法
2.2.1 奶牛子宫内膜上皮细胞样品的采集及预处理
2.2.2 奶牛子宫内膜上皮细胞体外原代培养
2.2.3 奶牛子宫内膜上皮细胞传代培养及鉴定
2.2.4 细胞冻存
2.2.5 细胞计数
2细胞缺氧模型的建立"> 2.2.6 CoCl2细胞缺氧模型的建立
2.2.7 实时荧光定量PCR
2.2.8 Western Blot检测
2.9 统计学分析
3 实验结果与分析
3.1 细胞培养结果
3.1.1 细胞原代培养
3.1.2 细胞传代培养及免疫组化鉴定
3.2 细胞缺氧模型建立结果
2作用下细胞死亡率"> 3.2.1 MTT法检测不同时间浓度CoCl2作用下细胞死亡率
2建立细胞缺氧模型方案确定"> 3.2.2 COCl2建立细胞缺氧模型方案确定
3.3 荧光定量PCR结果
3.3.1 细胞总RNA提取结果
3.3.2 cDNA扩增产物回收结果
3.3.3 实时荧光定量PCR结果
3.4 Western Blot结果
3.4.1 BoLA-A蛋白检测结果
3.4.2 MIC1蛋白检测结果
4 讨论
4.1 细胞缺氧模型的建立
4.2 缺氧对奶牛子宫内膜上皮细胞上BoLA-A与MIC1表达的影响
5 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]缺氧对胎盘滋养层细胞细胞周期和凋亡的影响[J]. 赵海君,张园,高玲玲,高超,崔毓桂,刘嘉茵. 江苏医药. 2012(19)
[2]胰腺癌组织HIF-1α和MICA/B的表达及意义[J]. 陆晔斌,孙维佳,胡娟娟,王志明. 临床肿瘤学杂志. 2012(07)
[3]二氯化钴化学缺氧对细胞滋养层细胞凋亡及侵润的影响[J]. 吴媛媛,刘海意,乔福元. 生殖与避孕. 2009(06)
[4]体外培养Schwann细胞缺氧模型的建立[J]. 朱浩,丁文龙,王文进,李锋. 解剖学杂志. 2008(02)
[5]缺氧对滋养细胞VEGF分泌与基因表达调控作用的研究[J]. 刘海意,乔福元,刘玉凌,龚洵,吴媛媛. 现代妇产科进展. 2008(03)
[6]大鼠海马神经细胞体外缺糖缺氧模型制备方法的改进[J]. 田映红,李树基,李晓文,高天明. 中国组织工程研究与临床康复. 2007(15)
[7]不同缺氧方法诱导BeWo细胞缺氧诱导因子 1α表达的实验研究[J]. 吴维光,陈亚琼,王玉萍,张明静. 武警医学院学报. 2005(02)
[8]围生期缺氧缺血后脑组织型纤溶酶原激活物的活性变化[J]. 徐剑文,张更,王玮,康仲涵,赵小贞. 实用儿科临床杂志. 2002(05)
[9]连二亚硫酸钠致PC12和NG108-15细胞拟缺血损伤研究[J]. 刘娜,左萍萍,周帆,张放,刘景生,任民峰. 中国药理学通报. 1998(06)
博士论文
[1]血红素氧合酶/一氧化碳系统在妊娠期高血压疾病患者发病机制中作用的研究[D]. 郭钰珍.华中科技大学 2006
硕士论文
[1]IFN-τ调控奶牛子宫上皮细胞表达MICB及BoLA-A的研究[D]. 吴岳.华中农业大学 2012
[2]低氧应答对妊娠期高血压疾病病理胎盘形成的影响[D]. 郭倩.第四军医大学 2011
本文编号：3010862
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
縮略语表
1 前言
1.1 BoLA-I研究进展
1.1.1 BoLA-A的结构与功能
1.1.2 MIC1的结构和功能
1.1.3 BoLA-I与奶牛妊娠免疫
1.2 缺氧环境与妊娠的关系
1.2.1 妊娠初期缺氧形成的原因
1.2.2 缺氧与HIF的关系
1.2.3 HIF与妊娠的关系
1.3 二氯化钴与缺氧的关系
1.4 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 试验动物
2.1.2 试验主要仪器设备
2.1.3 试验主要试剂
2.1.4 主要试剂配制
2.2 试验方法
2.2.1 奶牛子宫内膜上皮细胞样品的采集及预处理
2.2.2 奶牛子宫内膜上皮细胞体外原代培养
2.2.3 奶牛子宫内膜上皮细胞传代培养及鉴定
2.2.4 细胞冻存
2.2.5 细胞计数
2细胞缺氧模型的建立"> 2.2.6 CoCl2细胞缺氧模型的建立
2.2.7 实时荧光定量PCR
2.2.8 Western Blot检测
2.9 统计学分析
3 实验结果与分析
3.1 细胞培养结果
3.1.1 细胞原代培养
3.1.2 细胞传代培养及免疫组化鉴定
3.2 细胞缺氧模型建立结果
2作用下细胞死亡率"> 3.2.1 MTT法检测不同时间浓度CoCl2作用下细胞死亡率
2建立细胞缺氧模型方案确定"> 3.2.2 COCl2建立细胞缺氧模型方案确定
3.3 荧光定量PCR结果
3.3.1 细胞总RNA提取结果
3.3.2 cDNA扩增产物回收结果
3.3.3 实时荧光定量PCR结果
3.4 Western Blot结果
3.4.1 BoLA-A蛋白检测结果
3.4.2 MIC1蛋白检测结果
4 讨论
4.1 细胞缺氧模型的建立
4.2 缺氧对奶牛子宫内膜上皮细胞上BoLA-A与MIC1表达的影响
5 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]缺氧对胎盘滋养层细胞细胞周期和凋亡的影响[J]. 赵海君,张园,高玲玲,高超,崔毓桂,刘嘉茵. 江苏医药. 2012(19)
[2]胰腺癌组织HIF-1α和MICA/B的表达及意义[J]. 陆晔斌,孙维佳,胡娟娟,王志明. 临床肿瘤学杂志. 2012(07)
[3]二氯化钴化学缺氧对细胞滋养层细胞凋亡及侵润的影响[J]. 吴媛媛,刘海意,乔福元. 生殖与避孕. 2009(06)
[4]体外培养Schwann细胞缺氧模型的建立[J]. 朱浩,丁文龙,王文进,李锋. 解剖学杂志. 2008(02)
[5]缺氧对滋养细胞VEGF分泌与基因表达调控作用的研究[J]. 刘海意,乔福元,刘玉凌,龚洵,吴媛媛. 现代妇产科进展. 2008(03)
[6]大鼠海马神经细胞体外缺糖缺氧模型制备方法的改进[J]. 田映红,李树基,李晓文,高天明. 中国组织工程研究与临床康复. 2007(15)
[7]不同缺氧方法诱导BeWo细胞缺氧诱导因子 1α表达的实验研究[J]. 吴维光,陈亚琼,王玉萍,张明静. 武警医学院学报. 2005(02)
[8]围生期缺氧缺血后脑组织型纤溶酶原激活物的活性变化[J]. 徐剑文,张更,王玮,康仲涵,赵小贞. 实用儿科临床杂志. 2002(05)
[9]连二亚硫酸钠致PC12和NG108-15细胞拟缺血损伤研究[J]. 刘娜,左萍萍,周帆,张放,刘景生,任民峰. 中国药理学通报. 1998(06)
博士论文
[1]血红素氧合酶/一氧化碳系统在妊娠期高血压疾病患者发病机制中作用的研究[D]. 郭钰珍.华中科技大学 2006
硕士论文
[1]IFN-τ调控奶牛子宫上皮细胞表达MICB及BoLA-A的研究[D]. 吴岳.华中农业大学 2012
[2]低氧应答对妊娠期高血压疾病病理胎盘形成的影响[D]. 郭倩.第四军医大学 2011
本文编号：3010862
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