猪传染性胃肠炎病毒ORF7蛋白在ST细胞中定位及其对病毒复制影响的研究

发布时间：2021-01-31 18:33

　　为研究猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）ORF7蛋白的亚细胞定位及其在TGEV复制中的作用。本研究通过RT-PCR扩增TGEV ORF7基因,将其与真核表达载体pEGFP-C1和pEGFP-N1相连接,构建表达载体pGFP-ORF7（GFP融合在TGEV ORF7的-NH2端）和pORF7-GFP（GFP融合在ORF7的-COOH端）。分别将这两个质粒转染至ST细胞,western blot检测融合蛋白GFP-ORF7和ORF7-GFP的表达。通过生物信息学分析和激光共聚焦确定TGEV ORF7蛋白的亚细胞定位。在此基础上,通过细胞病变观察和荧光定量PCR检测TGEV ORF7蛋白对TGEV复制的影响。结果显示,本研究正确构建了真核表达载体pGFP-ORF7和pORF7-GFP,western blot检测结果表明融合蛋白GFP-ORF7和ORF7-GFP均正确表达,TGEV ORF7蛋白大小约为9 ku;结合生物信息学分析和激光共聚焦共定位结果显示TGEV ORF7特异性的定位于ST细胞的内质网中,其定位和其N端的信号肽序列有关;荧光定量PCR检测结果显示,过表达ORF7蛋白后TGEV ... 

【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(06)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

TGEV ORF7基因的PCR扩增结果

将各质粒转染ST细胞24 h后的观察结果显示，转染pGFP-ORF7、pORF7-GFP和空载体pEGFP-C1的细胞中均能观察到绿色荧光。表明标签蛋白GFP无论融合在TGEV ORF7的-NH2端和-COOH端，融合蛋白均可以表达。同时，western blot的鉴定结果显示，融合蛋白GFP-ORF7和ORF7-GFP分子质量均约为35 ku,GFP蛋白的分子质量为27 ku，据此推算TGEV ORF7蛋白的分子质量约为9 ku（图2）。上述结果表明TGEV ORF7蛋白在ST细胞中均得到正确表达。2.3 TGEV ORF7蛋白信号肽的生物信息学预测结果

通过生物信息学软件（http://ipsort.hgc.jp/predict.cgi），对TGEV ORF7蛋白结构进行生物信息学分析，肽段序列分析阈值为0.953，评分高于0.953及以上的序列成为信号肽的可能性大。TGEV ORF7蛋白分析结果显示，其N端的第1～30个氨基酸（MLV-FL HAVFI TVLIL LLIGR LQLLE RLLLN）的信号肽序列区域预测值为2.1933，即图中红色肽段区域，远高于信号肽预测的阈值（图3）。初步表明TGEV ORF7蛋白的N端1～30个氨基酸具有信号肽序列特征。2.4 TGEV ORF7蛋白的亚细胞定位结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]2014年～2016年山东省部分地区猪传染性胃肠炎流行病学调查[J]. 孙秋艳,孙霞,王志远,袁东芳.  中国预防兽医学报. 2018(03)
[2]猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的C和D线性抗原表位的抗原性比较[J]. 于天飞,张喜文,朱可佳,陈刚,李赫,陆泽,谢鹏宇.  中国预防兽医学报. 2016(11)
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本文编号：3011380