HDACi对牛成纤维细胞体外培养的影响

发布时间：2021-02-01 14:59

　　1997年,Wilmut等用成年体细胞获得第一只克隆绵羊Dolly,揭开了哺乳动物体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer, SCNT）的序幕,核移植研究进入了一个崭新的阶段。体细胞核移植为基础研究开创了更广阔的应用前景,但该仍存在很多问题亟待解决如克隆效率低,发育异常的发生率很高等。有研究表明,克隆胚胎或克隆后代的组蛋白表观遗传修饰出现不正常,表明供体细胞核在受体卵母细胞中不完全或异常的表观遗传是导致克隆胚胎发育异常的重要原因之一。目前已经有多种HDACis应用于体细胞重新编程方面的研究,但作用的效果差别很大,且报道大多集中在小鼠。尽管一些HDACis可以提高核重新编程,但它们同时也会对供核细胞产生危害。因此发现无毒或低毒性的HDACis可能对提高克隆效率修正不正常基因的重新编程尤为重要。本研究选取TSA和VPA两种组蛋白去乙酰化酶抑制剂处理牛成纤维细胞,探讨了HDACis对牛成纤维细胞体外培养的影响,试通过HDACis的添加,人为地干扰牛成纤维细胞组蛋白乙酰化状态,使之更加适于充当供核细胞,旨在为辅助生殖技术以及克隆效率的提高提供依据。本文以培养到第... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 体细胞克隆概述
        1.1.1 体细胞克隆现状及存在问题
        1.1.2 细胞核重新编程概述
        1.1.3 影响体细胞克隆效率因素
    1.2 组蛋白乙酰化研究概况
        1.2.1 组蛋白乙酰基转移酶
        1.2.2 组蛋白去乙酰化酶
        1.2.3 组蛋白去乙酰化酶抑制剂
    1.3 组蛋白乙酰化与细胞核重新编程
    1.4 本实验目的和意义
2 材料方法
    2.1 实验药品和主要仪器
        2.1.1 实验药品
        2.1.2 主要仪器
    2.2 实验动物
    2.3 主要溶液配制
    2.4 原代胎儿成纤维细胞的获得和原代培养
        2.4.1. 组织块培养法
    2.5 成纤维细胞的传代、冻存及复苏
        2.5.1 成纤维细胞的传代
        2.5.2 牛成纤维细胞的冻存
        2.5.3 牛成纤维细胞的复苏
    2.6 细胞计数与生长曲线的测定
        2.6.1 细胞计数
        2.6.2 测细胞生长曲线
    2.7 MTT法测细胞活力
    2.8 核型分析
    2.9 细胞周期的测定
    2.10 REAL-TIME PCR
        2.10.1 总RNA的提取
        2.10.2 反转录
        2.10.3 Real-Time PCR
    2.11 数据统计分析
3 结果
    3.1 组蛋白乙酰化酶抑制剂对牛成纤维细胞增殖的影响
        3.1.1 TSA处理组生长曲线的测定
        3.1.2 VPA处理组生长曲线的测定
    3.2 TSA和VPA处理后对牛胎儿成纤维细胞形态的影响
    3.3 TSA和VPA处理时间对牛成纤维细胞细胞活力的影响
    3.4 TSA和VPA处理对牛纤维细胞染色体整倍性的影响
    3.5 TSA和VPA对细胞周期的影响
    3.6 TSA和VPA对牛成纤维细胞转录因子的影响
4 讨论
    4.1 TSA和VPA对牛成纤维细胞体外生长的影响
    4.2 TSA和VPA处理对牛成纤维细胞细胞周期的影响
    4.3 TSA和VPA处理对牛成纤维细胞细胞转录因子表达的影响
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文



本文编号：3012956