H7N9流感病毒DNA疫苗的免疫保护效力研究
发布时间：2021-02-01 20:31
2013年H7N9新发突发流感疫情不仅给人类生活造成了严重的干扰和危害,也对我国养禽业造成了毁灭性的打击,疫苗研制是防控H7N9流感的必要技术储备。DNA疫苗能够同时诱导机体的细胞免疫和体液免疫反应,具有良好的交叉免疫保护力,而且制备简单,被认为是应对频繁变异的禽流感病毒（AIV）感染的理想疫苗。为了研制能够有效抵御H7N9流感的DNA疫苗,将H7N9流感病毒A/Anhui/1/2013（H7N9）[AH/1/2013（H7N9）]的HA基因进行了密码子优化和全基因合成,分别插入到载体pVAXl和pCAGGS中,构建了2种DNA质粒：pVAH7和pCAH7。将构建好的2种质粒转染293T细胞,进行间接免疫荧光、激光共聚焦和Western blot验证,结果表明,两种DNA质粒均可以在293T细胞中表达,表达的HA蛋白定位于细胞膜上。为评价质粒pVAH7和pCAH7对SPF鸡的免疫效力,将pVAH7以60μg剂量,pCAH7以15μg和60μg的剂量单次或加强免疫3周龄SPF鸡,分别在首次免疫后7周和加强免疫后4周在生物安全三级实验室以106EIDs。的流感病毒A/Chicken/Sha...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
质粒pVAH7的酶切分析鉴定
经双酶切之后获得了一条大小约为1707bp的HA片段和一条大约为SOOObp的pVAXl片段，结果与预期相符（图2-2)；；测序结果也表明目的基因HA正确插入到pVAXl载体中，重组质粒构建成功。1 M 2?"?3000b{K'1707bjK'1: pVAR-^ digested by EcoR lafi'd Xho I; 2: pVAXl;M: DNAm^ker(W(X>Obp)^图2-2 m P耀7的滅切分祈驗Ftg-2-2 Identification ofpVAH7 by restrtction snzyme double digestwrn^*"'2.2.2间接免疫焚光(I FA)检测结果pVAH7重组质粒转染293T细胞后可表达特异的H7N9流感病毒HA蛋白，只转染空载体的293T细胞阴性对照及阴性血清对照均未见有焚光表达产物，结果表明PVAH7重组质粒可以在293T细胞中高效表达且只与阳性血清发生特异性反应（图2-3)。INIRm!A. 293T cells transfected with p VAH7 at 48h： B. Transfected cells with Negative serum control； C. empty vectorcontrolA.转染质粒pCAGGoAHHA48小时后的293T细胞；B.—抗是阴性血清的对照；C.空载体转染对照图2_3 PVAH7转染293T细胞后的间接免疫焚光Fig. 2-3 Identification of HA protein oq^ression from pVAH7 in transfected 293T cells by IF A14
图2-4 optiAH7蛋白在293T细包中的定■(立Fig .Localization of protein ofoptiAH? in 293Tcelis2. 4 pVAH7 重组蛋白的 Western-bo It 鉴定按照2. 1.9中的方法，用pVAH7转染293T细胞，48h之后进行Western blot鉴定，扫膜后可
【参考文献】：
期刊论文
[1]国内外养禽业相关动态[J]. 侯雪娇,韦平. 广西畜牧兽医. 2014(02)
[2]广州市野生禽鸟从业人员H7N9禽流感知信行现状调查[J]. 刘艳慧,刘建平,刘于飞,袁俊,马晓薇,蔡文锋,王畅,李泳光. 疾病监测. 2014(01)
[3]我国H7N9禽流感疫情不同发展阶段的政府防控措施分析[J]. 刘剑,陈东,刘德海,徐维军. 新医学. 2014(01)
[4]当前肉鸡生产形势分析与后市预测[J]. 顾云飞. 家禽科学. 2014(01)
[5]人感染甲型H7N9禽流感疫情及动物源性疾病防控分析[J]. 龚震宇,陈恩富,吕华坤,凌锋,余昭,柴程良,孙继民,陈直平. 中国公共卫生. 2014(01)
[6]新型禽流感:H7N9[J]. 孙阳,沈银忠,林萍,刘莉,陈军,汤阳,邵家胜,齐唐凯,卢洪洲. 检验医学. 2013(09)
[7]人感染禽流感病毒H7N9的流行和防治:证据、挑战与思考[J]. 李向莲,李幼平. 中国循证医学杂志. 2013(07)
[8]人感染动物源性流感疫情的回顾及应对——从我国H7N9流感疫情谈起[J]. 黄平. 新医学. 2013(05)
[9]《人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第2版）》解读[J]. 李兰娟,刘克洲. 浙江医学. 2013(09)
[10]人禽流感概述[J]. 宋康兴,冯丽洁. 世界急危重病医学杂志. 2004 (02)
本文编号：3013388
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
质粒pVAH7的酶切分析鉴定
经双酶切之后获得了一条大小约为1707bp的HA片段和一条大约为SOOObp的pVAXl片段，结果与预期相符（图2-2)；；测序结果也表明目的基因HA正确插入到pVAXl载体中，重组质粒构建成功。1 M 2?"?3000b{K'1707bjK'1: pVAR-^ digested by EcoR lafi'd Xho I; 2: pVAXl;M: DNAm^ker(W(X>Obp)^图2-2 m P耀7的滅切分祈驗Ftg-2-2 Identification ofpVAH7 by restrtction snzyme double digestwrn^*"'2.2.2间接免疫焚光(I FA)检测结果pVAH7重组质粒转染293T细胞后可表达特异的H7N9流感病毒HA蛋白，只转染空载体的293T细胞阴性对照及阴性血清对照均未见有焚光表达产物，结果表明PVAH7重组质粒可以在293T细胞中高效表达且只与阳性血清发生特异性反应（图2-3)。INIRm!A. 293T cells transfected with p VAH7 at 48h： B. Transfected cells with Negative serum control； C. empty vectorcontrolA.转染质粒pCAGGoAHHA48小时后的293T细胞；B.—抗是阴性血清的对照；C.空载体转染对照图2_3 PVAH7转染293T细胞后的间接免疫焚光Fig. 2-3 Identification of HA protein oq^ression from pVAH7 in transfected 293T cells by IF A14
图2-4 optiAH7蛋白在293T细包中的定■(立Fig .Localization of protein ofoptiAH? in 293Tcelis2. 4 pVAH7 重组蛋白的 Western-bo It 鉴定按照2. 1.9中的方法，用pVAH7转染293T细胞，48h之后进行Western blot鉴定，扫膜后可
【参考文献】：
期刊论文
[1]国内外养禽业相关动态[J]. 侯雪娇,韦平. 广西畜牧兽医. 2014(02)
[2]广州市野生禽鸟从业人员H7N9禽流感知信行现状调查[J]. 刘艳慧,刘建平,刘于飞,袁俊,马晓薇,蔡文锋,王畅,李泳光. 疾病监测. 2014(01)
[3]我国H7N9禽流感疫情不同发展阶段的政府防控措施分析[J]. 刘剑,陈东,刘德海,徐维军. 新医学. 2014(01)
[4]当前肉鸡生产形势分析与后市预测[J]. 顾云飞. 家禽科学. 2014(01)
[5]人感染甲型H7N9禽流感疫情及动物源性疾病防控分析[J]. 龚震宇,陈恩富,吕华坤,凌锋,余昭,柴程良,孙继民,陈直平. 中国公共卫生. 2014(01)
[6]新型禽流感:H7N9[J]. 孙阳,沈银忠,林萍,刘莉,陈军,汤阳,邵家胜,齐唐凯,卢洪洲. 检验医学. 2013(09)
[7]人感染禽流感病毒H7N9的流行和防治:证据、挑战与思考[J]. 李向莲,李幼平. 中国循证医学杂志. 2013(07)
[8]人感染动物源性流感疫情的回顾及应对——从我国H7N9流感疫情谈起[J]. 黄平. 新医学. 2013(05)
[9]《人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第2版）》解读[J]. 李兰娟,刘克洲. 浙江医学. 2013(09)
[10]人禽流感概述[J]. 宋康兴,冯丽洁. 世界急危重病医学杂志. 2004 (02)
本文编号：3013388
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3013388.html
最近更新
教材专著
