犬四种病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立

发布时间：2021-02-02 02:31

　　犬瘟热病毒（CDV）、犬副流感病毒（CPIV）、犬细小病毒（CPV）和犬腺病毒Ⅱ型（CAV-2）是引起犬常见传染病的主要病原体,给养犬业带来了严重经济损失。本研究根据四种病毒在GenBank中登录的序列,设计四条引物和四条TaqMan探针,通过优化反应条件以及敏感性、特异性和重复性试验,建立四种病毒单重TaqMan实时荧光定量PCR方法以及四重TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果表明,四种病毒单重方法对CAV-Ⅱ、CPV、CPIV最小检出量均为101copies/μL,CDV最小检出量为102-101copies/μL,敏感性高;标准曲线线性关系良好,相关系数（R2）均大于0.990;四种病毒只在本病毒阳性模板有扩增信号,特异性强。CPV和CAV-Ⅱ两种病毒组内和组间变异系数均小于2%,CPIV和CDV两种病毒组内和组间变异系数均小于3%,重复性良好。检测了 72份样品结果均能特异性检测出四种病毒。四重方法的敏感性,CAV-Ⅱ和CDV可以达到102copies/μL,CPV和CPIV可以达到103 copies/μL,敏感性较高;标准曲线线性关系良好,相关系数（R2）均大于0.99... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３?ＣＰＶ目的片段扩增结果

?内蒙古农业大学硕士学位论文?１９??３．１．４四种病毒单重荧光定量ＰＣＲ敏感性试验结果??敏感性结果如（图９、图１０、图１１、图１２）显示ＣＡＶ－ＩＩ、ＣＰＶ、ＣＰＩＶ最小检??出量均为１〇］拷贝／｜ａＬ，ＣＤＶ最小检出量为ｌＯＭＯ１拷贝小Ｌ。结果表明本试验建立的??四种病毒ＴａｑＭａｉｉ单重荧光定量ＰＣＲ方法敏感性高。??Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ??：?：?：?ｊ?—?５０３０???????４。°°：??丨．．．．．．．４〇ａａ：?：???赚??，?３，０：?；???????分．方．觸ｊ???丨切：＞．卜叫呦．ｊ，ｌ资声、．＇ｙｆ…．??Ｏ－．ｙｉ?ｆ，Ｗ?ＺＶ?Ｚ?？?：?－ｐ?＇．乂?」丄夕－??．１．－１￣￣ｈ－ｒ－．￣￣丨?》ｉ?？?？，Ｉ?ｉ?，》＊?１￣￣ｉ?＞?？?’?．」?■，？．，■?ｉ，，卜》ｉ?？?？，，ｉ，＞?－＞?■?ｉ?■，＞??〇?１０?２Ｑ?３０?４０?Ｃ?１０?２０?３０?ＡＯ??Ｃｙｃｌｅｓ?Ｃｙｃｌｅｓ??图９?ＣＡＶ－１Ｉ敏感性实验结果?图１０?ＣＰＶ敏感性试验结果??Ｆｉｇ．９?ＣＡＶ－ＩＩ?ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ?ｒｅｓｕｌｔｓ?Ｆｉｇ．?１０?ＣＰＶ?ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ?ｒｅｓｕｌｔｓ??Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ??ｊｒ＇￣￣￣１＾?＾￣￣＇￣￣＇￣?［ｚｚｚｒｎ?１５〇〇－ｆ＇?＇?？？?＇?？?ｉ．－：■？?■？？？?＇?ｉ??６００??：？???？？：？？？？？？?—－??

图１５?ＣＡＶ－ＩＩ特异性试验结果


本文编号：3013881