我国牛结核病血清学筛查及其病原的分离鉴定

发布时间：2021-02-02 06:22

　　牛结核病（Bovine tuberculosis）是由牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis）引起的一种慢性传染性人兽共患病，被世界动物卫生组织（OIE）列为必报传染病，我国将其列为二类动物疫病。我国是全球第二大结核病高负担国家，全国近一半人口潜伏感染结核病，远高于全球三分之一的平均水平，而人感染结核病约有10.6%是由牛结核引起的；据统计，全球约有5000万头的牛感染或患有牛结核病，造成每年大约30亿美元的经济损失，不仅影响了世界奶牛养殖业持续健康的发展，而且严重威胁着公共卫生及食品安全。因此，开展牛结核流行病学调查及牛分枝杆菌的病原学研究，对防控及根除牛结核具有重要意义。本实验调查了我国部分省份的牛结核病流行情况，从新疆地区分离60株菌，用两级多重PCR方法鉴定分离菌株并检测牛结核分枝杆菌的耐药性。（1）牛结核病流行病学调查：本实验室于2011年10月至2012年6月先后赴新疆、河北、宁夏自治区等12个省份的29个县共97个场村采血，经γ-干扰素酶联免疫试验检测筛选，被检测的1187头奶牛中，阳性286份，阳性率24.1%。共检测97个群，群阳性率54.6%。（2）牛分... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Summary
第一篇 文献综述
    1 牛结核病概况
        1.1 牛结核病的病原学特征
        1.2 牛结核病的危害
    2 牛结核病的分布和流行情况
        2.1 发达国家和地区
        2.2 发展中国家和地区
        2.3 我国的现状
    3 牛结核的诊断
        3.1 细菌学检查方法
        3.2 免疫学方法
        3.3 分子生物学方法
    4 分枝杆菌的培养法
        4.1 固体培养法
        4.2 液体培养法
    5 非结核分枝杆菌的概况
    6 结核分枝杆菌耐药性
    7 研究目的及意义
第二篇 研究内容
    第一章 2011- 2012 年全国牛结核血清学筛查
        1 材料和方法
            1.1 材料
                1.1.1 样品
                1.1.2 主要试剂
                1.1.3 主要仪器
            1.2 牛结核分枝杆菌 PPD 皮内变态反应方法
                1.2.1 操作步骤
                1.2.2 结果判定（依照国标）
                1.2.3 注意事项
            1.3 γ-干扰素酶联免疫试验
                1.3.1 全血培养
                1.3.2 免疫试验
                1.3.3 质量控制
                1.3.4 结果判定
        2 结果
            2.1 个体阳性率
            2.2 群阳性率
            2.3 群间阳性率对比
            2.4 不同牛结核病检疫方法的比较结果
            2.5 禽分枝杆菌或其他 NTM 的感染情况
        3 讨论
            3.1 我国牛结核病和结核病流行病学调查结果
            3.2 不同牛结核病检测方法的比较
            3.3 影响牛结核病传播的因素
                3.3.1 野生动物结核病
                3.3.2 畜龄及性别
                3.3.3 饲养环境
            3.4 我国牛结核的感染趋势及禽分枝杆菌感染
            3.5 做好牛结核病的防控及根除计划
    第二章 牛源分枝杆菌的分离与鉴定
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株
                1.1.2 主要试剂及溶液
                1.1.3 萋尼氏染色法试剂配制（Ziehl-Neelson）
                1.1.4 培养基
                    1.1.4.1 罗氏培养基与丙酮酸钠培养基
                    1.1.4.2 液体培养基
                1.1.5 主要仪器
            1.2 方法
                1.2.1 病料的采集及处理
                1.2.2 分枝杆菌的初次培养
                1.2.3 分枝杆菌的扩大培养
                1.2.4 临床分离菌株的 Ziehl-Neelsen（Z-N）染色观察
                1.2.5 细菌 DNA 的提取
                1.2.6 细菌 DNA 的浓度测定
                1.2.7 临床分离株的种属多重 PCR 鉴定
                    1.2.7.1 引物的合成
                    1.2.7.2 反应体系和条件
                    1.2.7.3 判定标准
                1.2.8 临床分离株结核分枝杆菌群内 PCR 鉴定
                    1.2.8.1 引物合成
                    1.2.8.2 反应体系和条件
                    1.2.8.3 判定标准
                1.2.9 临床分离分枝杆菌 16S rRNA 基因序列分析
                    1.2.9.1 引物合成
                    1.2.9.2 反应体系和条件
                    1.2.9.3 PCR 反应产物的回收、纯化及定量
                    1.2.9.4 PCR 扩增产物序列测序
        2 结果
            2.1 病料采集
            2.2 分枝杆菌的初次培养
            2.3 分枝杆菌的扩大培养
            2.4 临床分离菌株的染色观察
            2.5 细菌 DNA 的浓度
            2.6 分枝杆菌种属鉴定结果
            2.7 结核分枝杆菌复合群鉴定结果
            2.8 16S rRNA 基因分析
                2.8.1 16S rRNA 基因 PCR 扩增结果
                2.8.2 核酸提取结果
                2.8.3 测序结果
        3 讨论
            3.1 结核分枝杆菌临床分离的重要性
            3.2 病料的采集、处理及涂片镜检
            3.3 培养基的选择
            3.4 模板对 PCR 扩增的影响因素
            3.5 牛源非结核分枝杆菌
    第三章 牛分枝杆菌的耐药相关基因分析及其快速检测
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株
                1.1.2 主要溶液和试剂
                1.1.3 主要试剂及溶液
                1.1.4 含药培养基
                1.1.5 主要仪器
            1.2 方法
                1.2.1 绝对浓度法
                1.2.2 耐药基因检测
                    1.2.2.1 DNA 模板
                    1.2.2.2 引物合成
                    1.2.2.3 PCR 扩增体系与条件
                    1.2.2.4 PCR 反应产物的回收、纯化及定量
                    1.2.2.5 耐药基因序列分析
        2 结果
            2.1 绝对浓度法
            2.2 耐药基因检测
        3 讨论
结论
参考文献
致谢
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本文编号：3014221