基于Pyolysin抗原优势区的重组免疫原制备与免疫保护效果评价
发布时间：2021-02-03 00:53
化脓隐秘杆菌（Trueperella pyogenes,T.pyogenes）是普遍存在于牛、羊、猪及其他重要经济动物黏膜上的一种条件性致病菌。T.pyogenes可在家畜间广泛传播,并导致多种皮肤、内脏器官及关节的非特异性化脓性感染。T.pyogenes溶血素蛋白（Pyolysin,PLO）是T.pyogenes分泌的唯一一种溶血素,也是T.pyogenes首要的毒力因子。目前分离的所有T.pyogenes菌株中都可以检测到PLO的表达。本研究首先利用重组蛋白PLO（recombinant PLO,rPLO）制备了不同动物抗rPLO多克隆抗体,并检测了五段位于PLO第1-3结构域（PLO D123）中截短蛋白rPLO 1-110、rPLO95-156、rPLO 141-204、rPLO 190-296以及rPLO 281-393与不同动物抗rPLO多克隆抗体的免疫反应性。Western-blot结果表明,兔抗rPLO多抗只能与rPLO 1-110及rPLO 190-296发生特异性反应,鼠抗rPLO多抗可以与rPLO 1-110、rPLO 95-156及rPLO 190-296发生特...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
产气荚膜梭菌溶血素PFO分子结构示意图
材料与方法er Premier5.0 软件设计融合片段上、下游引物，并在融合区域的上游引物中插入序-GGT-GGT-GGG-TCT-GGT-GGT-GGC-GGC-TCG 的一段核酸片段，这段序列编码为 10 个氨基酸残基的柔性连接肽（linker），其氨基酸序列为 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-G-Gly-Gly-Ser。同时引入酶切位点 EcoR Ι（GAATTC）、Xho Ι（CTCGAG）；引物的尔滨新海基因公司完成，如表 2-3。.6.2 重组抗原原核表达质粒的构建重组抗原编码核酸序列需要由 PLO D123 编码核酸中的 plo-85-411 片段及 plo-649-9别与 PLO D4 编码核酸 plo-D4 相融合，所以我们采用融合 PCR 的方法将两个片段完整的重组抗原编码核酸序列，融合示意图如图 2-1。
东北农业大学农学硕士学位论文3 结果与分析3.1 PLO D123 截短片段的制备构建成功的重组质粒转入 E. coli Rosetta（DE3） 感受态细胞中，经 IPTG 诱导表达、Ni-NTA Purification System 纯化 后 ，通 过 SDS-PAGE 以及 以 His 单 抗作 为 检测 抗 体 的Western-blot 进行分析，表明各截短蛋白大小与预期目的蛋白分子量相符，且蛋白条带较为单一，因此截短蛋白制备成功。截短蛋白制备合成方案如图 3-1。
本文编号：3015637
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
产气荚膜梭菌溶血素PFO分子结构示意图
材料与方法er Premier5.0 软件设计融合片段上、下游引物，并在融合区域的上游引物中插入序-GGT-GGT-GGG-TCT-GGT-GGT-GGC-GGC-TCG 的一段核酸片段，这段序列编码为 10 个氨基酸残基的柔性连接肽（linker），其氨基酸序列为 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-G-Gly-Gly-Ser。同时引入酶切位点 EcoR Ι（GAATTC）、Xho Ι（CTCGAG）；引物的尔滨新海基因公司完成，如表 2-3。.6.2 重组抗原原核表达质粒的构建重组抗原编码核酸序列需要由 PLO D123 编码核酸中的 plo-85-411 片段及 plo-649-9别与 PLO D4 编码核酸 plo-D4 相融合，所以我们采用融合 PCR 的方法将两个片段完整的重组抗原编码核酸序列，融合示意图如图 2-1。
东北农业大学农学硕士学位论文3 结果与分析3.1 PLO D123 截短片段的制备构建成功的重组质粒转入 E. coli Rosetta（DE3） 感受态细胞中，经 IPTG 诱导表达、Ni-NTA Purification System 纯化 后 ，通 过 SDS-PAGE 以及 以 His 单 抗作 为 检测 抗 体 的Western-blot 进行分析，表明各截短蛋白大小与预期目的蛋白分子量相符，且蛋白条带较为单一，因此截短蛋白制备成功。截短蛋白制备合成方案如图 3-1。
本文编号：3015637
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