兔免疫球蛋白轻链kappa与兔出血症病毒相互作用的研究
发布时间：2021-02-03 03:42
兔出血症（Rabbit hemorrhagic disease，RHD）是一种由兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagicdisease virus，RHDV）引起的急性、高度传染性、高死亡率的疾病。RHDV主要感染成年兔的肝脏、肺脏、脾脏等器官。RHDV属于杯状病毒科，其主要的结构蛋白衣壳蛋白VP60是病毒的免疫保护性抗原，在诱导宿主免疫反应中起着重要的作用。研究兔肝脏中与VP60相互作用的蛋白对阐明RHDV致病机制及兔出血症的防控具有重要意义。免疫球蛋白（Immunoglobulin）是一种具有抗体活性的球蛋白，在动物机体抵抗细菌、病毒感染过程中发挥着重要的作用。免疫球蛋白由两条重链和两条轻链组成，哺乳动物的免疫系统中存在两种不同类型的轻链kappa和lambda。本研究室使用酵母双杂交技术和表达克隆技术分别筛选与VP60相互作用的蛋白，提示兔免疫球蛋白轻链kappa（Kappa）与RHDV VP60可能存在相互作用。研究发现免疫球蛋白轻链有助于抗原抗体结合，能够促进B淋巴细胞受体的表达和抗体的分泌，广泛参与免疫调节。已经证实免疫球蛋白轻链能够结合肥大细胞，非特异性的轻链能...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 自然史
1.2 病原学
1.3 临床症状和病理变化
1.4 流行病学
1.5 病毒生活史
1.6 兔出血症的抵抗机制
1.7 诊断方法
1.7.1 血凝及血凝抑制试验（HA/HI）
1.7.2 酶联免疫吸附实验（ELISA）
1.7.3 反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）
1.7.4 实时荧光定量 PCR（real-time PCR）
1.7.5 环介导恒温快速扩增（LAMP）
1.8 防控及疫苗
1.9 蛋白质相互作用研究技术
1.9.1 酵母双杂交技术（ Yeast two hybrid system）
1.9.2 噬菌体表面展示技术（Phage surface display techniques, PDT）
1.9.3 GST-pulldown 技术
1.9.4 蛋白质细胞内定位技术
1.10 免疫球蛋白轻链研究进展
1.11 本研究的目的及意义
第二章 兔免疫球蛋白轻链 kappa 与 VP60 相互作用的验证
2.1 材料和方法
2.1.1 菌株、质粒、抗体、细胞
2.1.2 试剂与药品
2.1.3 主要仪器
2.1.4 Kappa 基因的克隆与表达
2.1.5 GST-polldown 验证 Kappa 蛋白与 VP60 的相互作用
2.1.6 细胞内共定位验证 Kappa 蛋白与 VP60 的相互作用
2.1.7 ELISA 验证 Kappa 蛋白与 VP60 的相互作用
2.2 结果
2.2.1 Kappa 基因的克隆
2.2.2 Kappa 蛋白的表达与纯化
2.2.3 Kappa 蛋白与 VP60 相互作用的 GST-polldown 验证结果
2.2.4 Kappa 基因真核表达载体的构建
2.2.5 Kappa 蛋白与 VP60 细胞内共定位结果
2.2.6 Kappa 蛋白与 VP60 相互作用的 ELISA 验证结果
2.3 讨论
2.3.1 Kappa 基因的克隆与表达
2.3.2 Kappa 蛋白与 VP60 相互作用的验证
第三章 Kappa 蛋白中和兔出血症病毒动物感染试验
3.1 材料与方法
3.1.1 病毒和实验动物
3.1.2 主要试剂及仪器
3.1.3 Kappa 蛋白与 RHDV 相互作用血凝抑制试验验证
3.1.4 Kappa 蛋白中和兔出血症病毒动物感染试验
3.1.5 RHDV 核酸的实时荧光定量 PCR 检测
3.2 结果
3.2.1 血凝抑制试验结果
3.2.2 兔出血症病毒攻毒剂量
3.2.3 动物感染试验结果
3.2.4 RHDV 核酸实时荧光定量 PCR 检测结果
3.3 讨论
3.3.1 Kappa 蛋白与 RHDV 相互作用的研究
3.3.2 Kappa 蛋白中和兔出血症病毒动物感染实验
第四章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪瘟病毒E2蛋白与猪RACK1相互作用的鉴定[J]. 凌理军,李素,董泓,贺番,冯烁,廖亚金,申梁,孙元,翁长江,仇华吉. 中国预防兽医学报. 2012(04)
[2]病毒受体研究技术进展[J]. 王睿,宋幸辉,王选年,鲍登克,王寅彪,张改平. 动物医学进展. 2011(06)
[3]兔出血症病毒衣壳蛋白VP60与兔肝脏细胞中相互作用蛋白的初步筛选[J]. 穆亚芳,刘家森,郭东春,李茂中,原冬伟,姜骞,林欢,曲连东. 中国预防兽医学报. 2011(05)
[4]T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3及其配体在慢性病毒感染中的作用研究进展[J]. 刘琼,谢冬英. 中华临床医师杂志(电子版). 2011(08)
[5]一种检测蛋白质相互作用的双荧光共定位系统[J]. 周军,周翠红,邓小燕,陶凤杰. 科技导报. 2011(08)
[6]GST pull-down验证流感病毒PB1-F2蛋白与热休克蛋白40的相互作用[J]. 侯佩莉,关振宏,张茂林,李影,段铭. 生物技术通报. 2011(01)
[7]兔肝组织cDNA文库的构建及表达序列标签分析[J]. 熊梅,穆亚芳,刘家森,原冬伟,郭东春,姜骞,林欢,曲连东. 中国兽医科学. 2010(11)
[8]兔出血症病毒检测方法研究进展[J]. 武昱孜,贾广乐,张映,张旭. 中国畜牧兽医. 2010(10)
[9]兔病毒性出血症研究进展[J]. 汤少伟. 上海畜牧兽医通讯. 2010(05)
[10]戊型肝炎病毒衣壳蛋白结合CYP 2A6并降低其底物催化能力[J]. 唐明,郑子峥,孙媛媛,何水珍,赵敏,黄慧,苗季,张军,夏宁邵. 病毒学报. 2009(01)
硕士论文
[1]人工感染兔出血症病毒兔肝脏的蛋白质组学分析[D]. 李茂中.中国农业科学院 2012
[2]兔出血症病毒VP60蛋白与膜突蛋白相互作用的鉴定[D]. 穆亚芳.中国农业科学院 2011
[3]应用GST Pull-Down实验验证NF-κB相互作用多肽[D]. 李生茂.第三军医大学 2004
本文编号：3015849
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 自然史
1.2 病原学
1.3 临床症状和病理变化
1.4 流行病学
1.5 病毒生活史
1.6 兔出血症的抵抗机制
1.7 诊断方法
1.7.1 血凝及血凝抑制试验（HA/HI）
1.7.2 酶联免疫吸附实验（ELISA）
1.7.3 反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）
1.7.4 实时荧光定量 PCR（real-time PCR）
1.7.5 环介导恒温快速扩增（LAMP）
1.8 防控及疫苗
1.9 蛋白质相互作用研究技术
1.9.1 酵母双杂交技术（ Yeast two hybrid system）
1.9.2 噬菌体表面展示技术（Phage surface display techniques, PDT）
1.9.3 GST-pulldown 技术
1.9.4 蛋白质细胞内定位技术
1.10 免疫球蛋白轻链研究进展
1.11 本研究的目的及意义
第二章 兔免疫球蛋白轻链 kappa 与 VP60 相互作用的验证
2.1 材料和方法
2.1.1 菌株、质粒、抗体、细胞
2.1.2 试剂与药品
2.1.3 主要仪器
2.1.4 Kappa 基因的克隆与表达
2.1.5 GST-polldown 验证 Kappa 蛋白与 VP60 的相互作用
2.1.6 细胞内共定位验证 Kappa 蛋白与 VP60 的相互作用
2.1.7 ELISA 验证 Kappa 蛋白与 VP60 的相互作用
2.2 结果
2.2.1 Kappa 基因的克隆
2.2.2 Kappa 蛋白的表达与纯化
2.2.3 Kappa 蛋白与 VP60 相互作用的 GST-polldown 验证结果
2.2.4 Kappa 基因真核表达载体的构建
2.2.5 Kappa 蛋白与 VP60 细胞内共定位结果
2.2.6 Kappa 蛋白与 VP60 相互作用的 ELISA 验证结果
2.3 讨论
2.3.1 Kappa 基因的克隆与表达
2.3.2 Kappa 蛋白与 VP60 相互作用的验证
第三章 Kappa 蛋白中和兔出血症病毒动物感染试验
3.1 材料与方法
3.1.1 病毒和实验动物
3.1.2 主要试剂及仪器
3.1.3 Kappa 蛋白与 RHDV 相互作用血凝抑制试验验证
3.1.4 Kappa 蛋白中和兔出血症病毒动物感染试验
3.1.5 RHDV 核酸的实时荧光定量 PCR 检测
3.2 结果
3.2.1 血凝抑制试验结果
3.2.2 兔出血症病毒攻毒剂量
3.2.3 动物感染试验结果
3.2.4 RHDV 核酸实时荧光定量 PCR 检测结果
3.3 讨论
3.3.1 Kappa 蛋白与 RHDV 相互作用的研究
3.3.2 Kappa 蛋白中和兔出血症病毒动物感染实验
第四章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪瘟病毒E2蛋白与猪RACK1相互作用的鉴定[J]. 凌理军,李素,董泓,贺番,冯烁,廖亚金,申梁,孙元,翁长江,仇华吉. 中国预防兽医学报. 2012(04)
[2]病毒受体研究技术进展[J]. 王睿,宋幸辉,王选年,鲍登克,王寅彪,张改平. 动物医学进展. 2011(06)
[3]兔出血症病毒衣壳蛋白VP60与兔肝脏细胞中相互作用蛋白的初步筛选[J]. 穆亚芳,刘家森,郭东春,李茂中,原冬伟,姜骞,林欢,曲连东. 中国预防兽医学报. 2011(05)
[4]T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3及其配体在慢性病毒感染中的作用研究进展[J]. 刘琼,谢冬英. 中华临床医师杂志(电子版). 2011(08)
[5]一种检测蛋白质相互作用的双荧光共定位系统[J]. 周军,周翠红,邓小燕,陶凤杰. 科技导报. 2011(08)
[6]GST pull-down验证流感病毒PB1-F2蛋白与热休克蛋白40的相互作用[J]. 侯佩莉,关振宏,张茂林,李影,段铭. 生物技术通报. 2011(01)
[7]兔肝组织cDNA文库的构建及表达序列标签分析[J]. 熊梅,穆亚芳,刘家森,原冬伟,郭东春,姜骞,林欢,曲连东. 中国兽医科学. 2010(11)
[8]兔出血症病毒检测方法研究进展[J]. 武昱孜,贾广乐,张映,张旭. 中国畜牧兽医. 2010(10)
[9]兔病毒性出血症研究进展[J]. 汤少伟. 上海畜牧兽医通讯. 2010(05)
[10]戊型肝炎病毒衣壳蛋白结合CYP 2A6并降低其底物催化能力[J]. 唐明,郑子峥,孙媛媛,何水珍,赵敏,黄慧,苗季,张军,夏宁邵. 病毒学报. 2009(01)
硕士论文
[1]人工感染兔出血症病毒兔肝脏的蛋白质组学分析[D]. 李茂中.中国农业科学院 2012
[2]兔出血症病毒VP60蛋白与膜突蛋白相互作用的鉴定[D]. 穆亚芳.中国农业科学院 2011
[3]应用GST Pull-Down实验验证NF-κB相互作用多肽[D]. 李生茂.第三军医大学 2004
本文编号：3015849
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