miR-375/499在猪睾丸组织不同发育阶段表达研究及靶基因验证

发布时间：2021-02-03 13:08

　　MicroRNAs（miRNAs）是一类小的内源性非编码序列，广泛地存在于多种组织和器官中，通过降解mRNA或阻碍其翻译的方式调节靶基因，从而实现对生命体重要的调控作用。有研究表明，miRNAs在睾丸组织中也有表达，并且对曲细精管的发育及精子成熟都有重要的调控作用。miR-375和miR-499是经过前人高通量测序鉴定出在军牧1号白猪1月龄睾丸组织和6月龄睾丸组织中存在差异表达的两个miRNAs，因此本研究针对miR-375和miR-499在1日龄，1-7月龄睾丸组织中的表达水平进行检测，并且对它们的靶基因进行验证。首先观察了1日龄，1-7月龄的军牧1号种公猪睾丸组织形态。结果表明，随月龄增大，睾丸组织中曲细精管管腔逐渐增大，同一视野下，曲细精管数目逐渐减少，并且曲细精管管腔之间的结缔组织也逐渐减少，管腔中的支持细胞和精母细胞逐渐向基底膜靠近。与此同时，对不同月龄睾丸组织中生物信息学预测的miR-375可能的靶基因DIAPH2, YAP1, YBX1, ITPKB和NR5A2，miR-499可能的靶基因CYLC1, DMRT1,QKI, XRN2和ZNF313进行了实时荧光定量检测。结... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

HE染色法对不同发育阶段睾丸组织的形态学观察Fig.1.1MorphologyoftestisatdifferentdevelopmentalstageswereobservedbyHEstaining

篇 研究内容 第 2 章 不同发育阶段猪睾丸组织中 miR-375/499 及其预测的靶基因的表达规律的条带时，将底片在清水中洗一下，再定影液中定影。最后将带有实验结片扫描到电脑中，进行结果分析。 结果.1 睾丸组织中 RNA 和蛋白质提取，cDNA 合成检测结果对不同月龄睾丸组织中提取的 RNA 进行琼脂糖凝胶电泳检测和分光光测，可以看出 RNA 提取结果较好，无降解，并且浓度均在 300ng/ul 左右于后面的实验（如图 2.1-Fig.A-a）。

第二篇 研究内容 第 2 章 不同发育阶段猪睾丸组织中 miR-375/499 及其预测的靶基因的表达规律研究2.3.2 实时荧光定量检测 miR-375 和 DIAPH2、YAP1、YBX1、NR5A2、ITPKB表达水平qPCR 对 1 日龄，1-7 月龄睾丸组织中 miR-375 的表达量检测表明，8 个发育阶段睾丸组织中 miR-375 表达量呈现上调趋势，在前 5 个月龄表达量极低，5-7月迅速升高。靶基因 NR5A2 呈现先下调再上调趋势，在 3-5 月龄时表达量较低。

【参考文献】：
期刊论文
[1]睾丸发育和精子生成相关miRNA研究进展[J]. 冉茂良,陈斌,尹杰,杨岸奇,蒋明.  遗传. 2014(07)
[2]miR-122对乙型肝炎病毒抗原表达的影响[J]. 朱蕾,陈智,陈建忠,王静,胡中荣,陈离伟,刘荣华,胡敏君,朱海红.  浙江大学学报(医学版). 2011(06)
[3]流式细胞仪富集大鼠A1～A4型精原干细胞[J]. 白杨,叶哲伟,曾甫清.  中华男科学杂志. 2008(01)



本文编号：3016553