抗NcP40单抗制备及牛新孢子虫感染ELISA和胶体金检测方法的建立

发布时间：2021-02-04 01:18

　　新孢子虫病（Neosporiasis）是由犬新孢子虫（Neospora caninum）引起的原虫病,呈世界性分布,感染率为10%-40%,最高达82%。犬及犬科动物是新孢子虫的终末宿主,中间宿主范围广泛,包括牛、羊、鹿、马、犬、兔等家畜及海洋哺乳动物。其中对牛的危害最为严重,感染后引起新生犊牛运动障碍和神经系统疾病,怀孕母牛出现流产、产死胎、木乃伊胎等,但是检测方法报道有限,尤其是检测循环抗原的相关报道。因此,在此基础上建立一种便捷、灵敏、特异、快速的检测方法对牛新孢子虫病的诊断及预防显得尤为重要。本研究以新孢子虫表面抗原P40作为免疫抗原,制备了单克隆抗体,对其进行了亚细胞定位,随后建立了检测循环抗原的双抗夹心ELISA方法,利用纯化的新孢子虫Nc P40重组蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA、Dot-ELISA和胶体金试纸条检测方法,以期为牛新孢子虫病的诊断提供更加快速简便的方法。抗Nc P40单克隆抗体的制备与Nc P40蛋白亚细胞定位:本研究成功表达并纯化了新孢子虫Nc P40蛋白,经验证免疫原性和反应原性良好;利用纯化的Nc P40重组蛋白免疫Balb/c小鼠,筛选得到6... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

新孢子虫虫体形态，D、E、F分别为新孢子虫速殖子、包囊、卵囊（引

虫在终末宿主肠上皮细胞内发育，在中间宿主体内进行出体外后 24~48h 会形成孢子化卵囊，终末宿主犬食入在胃内被消化，释放的子孢子和速殖子侵入宿主有核细细胞内形成纳虫泡，逃避宿主免疫，进而进行发育和、小配子结合成合子，最后发育为卵囊，卵囊随粪便卵囊污染饲料和饮水后，中间宿主便可通过食入感染新以通过水平和垂直两种方式进行传播，垂直传播是牛及要方式，母牛将病原传播给胎儿，胎儿可以作为储存宿主作为新孢子虫的终末宿主，大多数新生幼犬在产后 5明多数可能是在产后泌乳期感染[34]。国外有报道称，1下的幼犬新孢子虫感染阳性率只有 3%（4/118）[35]。可分来自垂直传播，水平传播在新孢子虫病感染中具有重

2 试验结果2.1 NcP40 的原核表达成功扩增了NcP40抗原相关结构域，大小为777bp，见图1.1A；经双酶切鉴定成功的阳性质粒，转化表达感受态，IPTG诱导表达的重组蛋白，经SDS-PAGE分析，结果显示，重组蛋白大小为40KDa，见图1.1B；经Western bloting 鉴定，


本文编号：3017473