仔猪小肠上皮细胞的体外培养及猪流行性腹泻病毒对其感染性研究

发布时间：2021-02-04 04:50

　　本研究旨在建立一种操作简单的仔猪小肠上皮细胞体外培养体系,为猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）的相关研究提供材料。研究以未吃初乳的新生仔猪作为肠道供体,采用肠腔面刮取肠黏膜和机械分离分散的方式进行原代细胞的体外分离。采用0.1%胰蛋白酶差速消化法进行仔猪小肠上皮细胞的纯化;比较新生弱仔猪和正常仔猪作为供体对原代小肠上皮细胞活性的影响;MTT法比较不同代次原代细胞的增殖活性;免疫荧光和实时荧光定量RT-PCR方法检测PEDV毒株CV777在原代小肠上皮细胞感染和增殖情况。结果显示,本研究建立的体外分离培养方法能获得增殖活性良好的原代小肠上皮细胞,具有明显的"S"型细胞增殖曲线。通过胰酶差速消化可得到纯度高、形态单一的小肠上皮细胞,同时细胞连续传代5次仍保持良好的增殖活性。弱仔猪和正常仔猪分离培养的小肠上皮细胞的增殖活性比较显示,两者并没有明显区别,这为降低原代细胞培养的成本提供新的思路。免疫荧光和实时荧光定量RT-PCR结果显示,PEDV可感染本方法分离培养的仔猪原代小肠上皮细胞,并在其中进行复制增殖。本研究建立了一种操作简单、实... 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(12)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

仔猪原代小肠上皮细胞培养第5(A)和15天(B)的形态

仔猪原代小肠上皮细胞的鉴定

仔猪原代小肠上皮细胞增殖活性

【参考文献】：
期刊论文
[1]猪流行性腹泻病毒变异株CH/GX/750A/2015在Vero细胞上转瓶培养条件的优化试验[J]. 卢冰霞,陶明华,赵硕,秦毅斌,刘磊,陈忠伟,何颖,段群棚,梁家幸,周英宁,李斌,蒋冬福,杨思仪,赵武.  中国畜牧兽医. 2020(05)
[2]2016-2019年广西部分猪场仔猪病毒性腹泻的流行病学调查[J]. 段群棚,李晓玉,赵硕,秦毅斌,卢冰霞,李斌,苏乾莲,赵武,何颖,梁家幸,蒋冬福,周英宁,陈忠伟.  中国畜牧兽医. 2020(02)
[3]仔猪肠黏膜上皮细胞体外培养及其对小檗碱适应性的研究[J]. 李妹玲,乔宁,陈立功,徐环叶,徐倩倩,王迎春,董世山.  河北农业大学学报. 2016(01)
[4]猪流行性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用[J]. 沈学怀,潘孝成,巩雅静,张丹俊,赵瑞宏,胡小苗,戴银,侯红艳,周学利,朱传民.  养猪. 2014(06)
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[6]新生仔猪小肠上皮细胞体外培养的研究[J]. 李莉,高淑静,张守全,陈俊伟,陆咸赏,罗园,江青艳.  仲恺农业工程学院学报. 2010(01)
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本文编号：3017752