稳定表达结核分枝杆菌Rv3802c蛋白的RAW264.7细胞系的构建
发布时间：2021-02-04 05:14
结核分枝杆菌是一种能持留于宿主巨噬细胞内的病原菌,它主要感染肺部,引起肺结核。在感染过程中,它的潜伏特性和适应环境变化的能力,是结核病难以控制和根除的根本原因。世界上将近1/3的人口皮肤试验为感染阳性,被认为是细菌携带者,每年引起超过800万人患病,结核病仍然是世界第二大导致成年人死亡的传染病。结核分枝杆菌的持留感染状态已经成为消灭结核病的最大障碍之一已有研究表明,一些PE/PPE家族蛋白及细胞壁成分有助于结核分枝杆菌在巨噬细胞内的持留存活。而Rv3802c蛋白参与结核分枝杆菌细胞壁的构建,且含有PE/PPE家族蛋白的同源区,但是其在分枝杆菌感染巨噬细胞过程中的具体作用仍然未知。本研究设计构建稳定表达Rv3802c蛋白的巨噬细胞系,以分析该细胞系表达谱发生的变化,来推测Rv3802c蛋白在结核分枝杆菌感染巨噬细胞过程中可能发挥的作用。本研究利用重叠延伸PCR技术,扩增出含His、Flag标签的rv3802c全长基因38LHF和rv3802c截短基因38SHF,将其克隆到真核表达载体pCDNA3.1（+）上,测序验证后,将内部核糖体进入位点和增强型红色荧光蛋白基因片段IRES-DsRed...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
结核分枝杆菌感染模型
学位论文 第二章稳定表达结核分枝杆菌Rv3802c的RAW264.7c信号肽预测结果白信号肽预测分析（图2-2),结果显示该蛋白的1?40 aa为可能的了获取更可靠的结果，设计两种基因引物，一种包括信号SgnalP-4.1 prediction (gram* networks): gi_15810938_ref_NP_218319 1_
为了获取更可靠的结果，设计两种基因引物，一种包括信号肽，一种不包。SgnalP-4.1 prediction (gram* networks): gi_15810938_ref_NP_218319 1_C^SCOf? I I1.0 - 一^ S score . ^Y-scor0 ——08 - V \06 - \g V (? 04 ? A V.A-1III - - -1.. 00 JlllllllllllllllllllllllilllllillllllllllllllWH^TMrtiWKKsnnmHR ■ **<mimbvv?IV iVAWI uinrMespraAVPMSVI，p<M>T0 10 20 30 40 50 60 70Position图2-2 Rv3802c蛋白信号狀预测Fig 2-2 The prediction ofRv3802c signal peptide重叠延伸PCR扩增结果1%琼脂糖凝胶电泳分析，显示重叠延伸PCR的第一步PCR扩增出的片段大小分别为和920 bp左右，与38L和38S基因大小相符；扩增出的200 bp左右的片段，与HisFlag-tag60 bp)大小相符（图2-3A)。第二步PCR扩增出1200 bp和1100 bp左右的片段，与R8LHF和38SHF大小相符（图2-3B)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]结核分枝杆菌与巨噬细胞相互作用的研究进展[J]. 刘云霞,张万江. 中国细胞生物学学报. 2012(06)
[2]结核分枝杆菌持留生存机制的研究进展[J]. 何子纯,李升锦. 中国防痨杂志. 2010(01)
[3]牛结核病病原生态学和流行病学研究[J]. 刘思国,王春来,张秀华,郭设平,郭洋,邵美丽. 中国畜牧兽医. 2005(03)
[4]多基因共表达载体的构建策略[J]. 曹慧青. 国外医学(分子生物学分册). 2002(01)
硕士论文
[1]结核分支杆菌Rv0199和Rv3802c蛋白单克隆抗体的制备[D]. 刘银冰.黑龙江八一农垦大学 2013
本文编号：3017787
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
结核分枝杆菌感染模型
学位论文 第二章稳定表达结核分枝杆菌Rv3802c的RAW264.7c信号肽预测结果白信号肽预测分析（图2-2),结果显示该蛋白的1?40 aa为可能的了获取更可靠的结果，设计两种基因引物，一种包括信号SgnalP-4.1 prediction (gram* networks): gi_15810938_ref_NP_218319 1_
为了获取更可靠的结果，设计两种基因引物，一种包括信号肽，一种不包。SgnalP-4.1 prediction (gram* networks): gi_15810938_ref_NP_218319 1_C^SCOf? I I1.0 - 一^ S score . ^Y-scor0 ——08 - V \06 - \g V (? 04 ? A V.A-1III - - -1.. 00 JlllllllllllllllllllllllilllllillllllllllllllWH^TMrtiWKKsnnmHR ■ **<mimbvv?IV iVAWI uinrMespraAVPMSVI，p<M>T0 10 20 30 40 50 60 70Position图2-2 Rv3802c蛋白信号狀预测Fig 2-2 The prediction ofRv3802c signal peptide重叠延伸PCR扩增结果1%琼脂糖凝胶电泳分析，显示重叠延伸PCR的第一步PCR扩增出的片段大小分别为和920 bp左右，与38L和38S基因大小相符；扩增出的200 bp左右的片段，与HisFlag-tag60 bp)大小相符（图2-3A)。第二步PCR扩增出1200 bp和1100 bp左右的片段，与R8LHF和38SHF大小相符（图2-3B)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]结核分枝杆菌与巨噬细胞相互作用的研究进展[J]. 刘云霞,张万江. 中国细胞生物学学报. 2012(06)
[2]结核分枝杆菌持留生存机制的研究进展[J]. 何子纯,李升锦. 中国防痨杂志. 2010(01)
[3]牛结核病病原生态学和流行病学研究[J]. 刘思国,王春来,张秀华,郭设平,郭洋,邵美丽. 中国畜牧兽医. 2005(03)
[4]多基因共表达载体的构建策略[J]. 曹慧青. 国外医学(分子生物学分册). 2002(01)
硕士论文
[1]结核分支杆菌Rv0199和Rv3802c蛋白单克隆抗体的制备[D]. 刘银冰.黑龙江八一农垦大学 2013
本文编号：3017787
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3017787.html
