基于乙肝核心抗原和猪流行性腹泻病毒S蛋白B细胞复合表位基因重组疫苗的免疫原性研究

发布时间：2021-02-09 03:51

　　为了研制新型、有效的猪流行性腹泻病毒（PEDV）疫苗,本研究以乙肝核心抗原蛋白（HBcAg）作为多表位免疫原的载体蛋白,将PEDV S蛋白中的3个B细胞表位基因与S1截短序列基因串联后,插入到编码HBcAg的免疫显性区的基因中,构建重组质粒HBcAg-PE,并转化至大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达。重组蛋白HBPE经过纯化和Western-blot鉴定后,以不同剂量的重组蛋白通过肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,对其免疫效果进行了初步评价。结果显示,重组蛋白HBPE在BL21（DE3）中以沉淀形式表达,纯化、复性后的重组蛋白HBPE能够与PEDV阳性血清发生特异性反应。重组蛋白HBPE能够刺激小鼠产生抗PEDV特异性抗体,同时可以产生相关的Th1型和Th2型细胞因子。上述结果表明,本研究成功构建了PEDV重组B细胞复合表位抗原HBPE,并在小鼠模型中初步评价了其免疫原性,为今后新型PEDV基因工程疫苗的研制提供了新的思路。 

【文章来源】：中国兽医科学. 2020,50(06)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

重组质粒HBPE的双酶切鉴定Figure1IdentificationofrecombinantplasmidHBPEby250bp100bp

：HBPE纯化后复性产物。M：Proteinmolecularweightstandard；1：Therefoldedproductofpuri-fiedHBPE.图3HBPE表达鉴定的SDS-PAGE分析Figure3SDS-PAGEanalysisoftherecombinantproteinHBPEM：蛋白质分子质量标准；1：未诱导对照；2：HBPE过夜诱导；3：菌体超声破碎后上清；4：菌体超声破碎后沉淀。M：UnstainedproteinmolecularweightMarker；1：HBPEwithoutin-duction；2：HBPEatovernightbyinduced；3：Supernatantafterultra-sonicfragmentationofHBPE；4：Precipitationafterultrasonicfragmen-tationofHBPE.图2阳性表达菌株的筛选Figure2ScreeningofpositiveexpressionstrainsM：蛋白质分子质量标准；1、2：单克隆菌株诱导表达；3：未诱导对照。M：UnstainedproteinmolecularweightMarker；1，2：Inducedexpressionofmonoclonalmtrains；3：Unconditionedcontrol.纯度可达到85％以上，质量浓度约为0.5mg/mL。2.5目的蛋白的Western-blot检测Western-blot检测结果（图5）显示，纯化复性后的蛋白HBPE可以和PEDV阳性血清发生良好反应。2.6特异性抗体的ELISA检测ELISA检测结果（图6）显示，重组抗原HBPE和商品化灭活疫苗经左后腿肌内首次免疫小鼠后，2周内小鼠体内产生抗PEDV特异性抗体，首次免疫后第14天加强免疫，产生的抗PEDV特异性抗体水平明显升高。整个过程中，免疫灭活疫苗组的抗体水平最高，于首次免疫后第21天与其他组均产生显著差异（P＜0.01），PE25组和PE50组抗体水平于首次免疫后第21天后显著高于阴性对照PBS免疫组（P＜0.01），PE25组和PE50组之间抗体水平无差异，整个过程中，PBS组并未检测到抗PEDV特异性抗体。2.7细胞因子的检测情况为了进一步检测免疫小鼠产生的免疫应答的94ku66.2ku45ku33ku

HBPE表达鉴定的SDS-PAGE分析


本文编号：3025001