Cyclopamine对牛脂肪间充质干细胞的细胞周期及成骨与成脂分化的影响

发布时间：2021-02-10 23:51

　　间充质干细胞具有自我更新和多向分化的能力,能在体外诱导成脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞、肌细胞等,所以越来越多的研究集中在其增殖与分化机制方面。希望将其作为种子细胞,能够在临床坏死损伤组织器官的修复治疗中起到一定作用。而脂肪间充质干细胞（adipose mesenchymal stem cells, AMSCs）取讨方便,来源较为丰富。本试验利用hedgehog信号通路的特异性抑制剂cyclopamine（CPA）,对牛AMSCs的细胞分裂周期及成骨与成脂诱导分化的机制做了初步探讨。我们首先获得牛AMSCs,然后用CPA处理AMSCs,用real-time PCR方法检测不同时期周期蛋白cyclinA、cyclinD、cyclinE、及定向分化过程中关键基因的表达。主要开究成果如下：（1）采用胶原酶Ⅳ法消化分离,体外培养观察其形态,用免疫荧光化学的方法鉴定其表面标记抗原,加入成脂成骨诱导液诱导其分化,用油红O和ALP检测其分化能力。结果证实,分离培养出的细胞是脂肪间充质干细胞。检测表明,CD44、CD49、CD105表达呈阳性；CD34表达呈阴性；用油红O和ALP染色后都呈阳性。（2）用5... 

【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
目录
一、试验研究
    前言
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 试验动物
            1.1.2 实验试剂及耗材
            1.1.3 试验仪器与器械
            1.1.4 试验试剂的配制
        1.2 实验方法
            1.2.1 AMSCs的分离
            1.2.2 AMSCs的冷冻
            1.2.3 AMSCs的解冻复苏培养
            1.2.4 AMSCs生长曲线的绘制
            1.2.5 AMSCs的成脂诱导
            1.2.6 AMSCs的成骨诱导
            1.2.7 荧光免疫组化鉴定AMSCs表面标记
            1.2.8 血清饥饿培养
            1.2.9 CPA处理细胞检测细胞周期
            1.2.10 CPA处理后对细胞凋亡的检测
            1.2.11 Real-time PCR对周期蛋白基因表达的分析
            1.2.12 脂肪分化关键基因PPARγ的分析
            1.2.13 成骨分化关键基因Runx的分析
            1.2.14 数据分析
    2 结果
        2.1 形态学观察
        2.2 生长曲线
        2.3 成脂诱导
        2.4 成骨诱导
        2.5 荧光免疫组化鉴定AMSCs表面标记
        2.6 CPA处理同步化AMSCs对细胞周期进程的影响
        2.7 CPA处理对AMSCs凋亡的影响
        2.8 CPA处理对周期蛋白cyclinA、cyclinD、cyclinE表达的影响
            2.8.1 cyclinA、cyclinD、cyclinE的标准曲线
            2.8.2 CPA处理
        2.9 CPA对AMSCs成脂分化关键基因PPARγ的影响
            2.9.1 PPARγ标准曲线
            2.9.2 脂肪分化关键基因PPARγ的表达
        2.10 CPA对AMSCs成骨分化关键基因Runx的影响
            2.10.1 Runx标准曲线
            2.10.2 成骨分化关键基因Runx的表达
    3 讨论
    4 小结
    参考文献
二、文献综述
    1 Hh信号通路的转导过程
        1.1 Hedgehog蛋白的合成
        1.2 Hedgehog蛋白的转运
        1.3 转录因子的激活
    2 Hh信号通路的作用
        2.1 对胚胎发育的影响
        2.2 Hedgehog蛋白促进MSCs的增殖
        2.3 Hedgehog蛋白促进MSCs的分化
            2.3.1 成骨分化
            2.3.2 成脂分化
            2.3.3 成肌作用
            2.3.4 在肿瘤及癌症发生方面的作用
    3 cyclopamine研究
        3.1 cyclopamine的来源与发现
        3.2 cyclopamine对hedgehog信号通路的作用
    参考文献
攻读硕士期间发表及待发表的论文
致谢



本文编号：3028178